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基于报告基因的抗CD3×GPRC5D双特异性抗体生物学活性测定方法建立
文献摘要：
目的:建立抗CD3×GPRC5D双特异性抗体(bispecific antibody,BsAb)生物学活性的报告基因测定方法.方法:构建Jurkat/NFAT-Luc转基因细胞株作为效应细胞,MM.1R细胞系作为靶细胞,建立和优化抗CD3×GPRC5 D双特异性抗体生物学活性检测方法并进行方法学验证.分别用优化后的报告基因法和PBMC杀伤试验评价不同类型的抗CD3×GPRC5 D双特异性抗体生物学活性.结果:报告基因法优化后确定靶细胞为MM.1R细胞,细胞铺板密度为2×104个·孔-1,效靶比1:1,抗体起始浓度为20μg·mL-1,2倍稀释1次后,再6倍梯度稀释,共10个浓度点,诱导时间6 h.方法 验证结果说明该方法具有良好的专属性,制备50％,75％,100％,150％和200％理论效价样品,进行准确性、精密度和线性验证,结果显示生物学活性回收率在97.85％ ～106.51％,变异系数均<10％;相对效价理论值与实测值直线回归分析相关系数为0.9978.同时,该方法适用于各类抗CD3×GPRC5 D双特异性抗体,均有较好的剂量反应曲线,且与PBMC杀伤试验结果具有较好的一致性.结论:本研究成功建立抗CD3×GPRC5 D双特异性抗体生物学活性的报告基因检测方法,该方法具有较高的准确性和精密度,且特异性良好,可作为此类双特异性抗体活性评价的常规方法.
文献关键词：
抗CD3×GPRC5D双特异性抗体;生物学活性;报告基因法
中图分类号：
作者姓名：
李娜;吴振华;梅小芬;柳颖;陈瑶;陈娟;蒋美珠;王海彬
作者机构：
浙江博锐生物制药有限公司,台州318000
文献出处：
引用格式：
[1]李娜;吴振华;梅小芬;柳颖;陈瑶;陈娟;蒋美珠;王海彬-.基于报告基因的抗CD3×GPRC5D双特异性抗体生物学活性测定方法建立)[J].中国新药杂志,2022(15):1474-1479
A类：
GPRC5
B类：
CD3,GPRC5D,双特异性抗体,生物学活性测定,测定方法,bispecific,antibody,BsAb,基因测定,Jurkat,NFAT,Luc,转基因细胞,细胞株,效应细胞,MM,1R,细胞系,靶细胞,活性检测,方法学验证,报告基因法,PBMC,杀伤,试验评价,铺板,起始浓度,梯度稀释,诱导时间,专属性,效价,精密度,线性验证,理论值,实测值,剂量反应,基因检测,活性评价,常规方法
AB值：
0.315521
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