典型文献
影响大肠杆菌不耐热肠毒素2型毒性的氨基酸初步筛选
文献摘要：
为探究影响产肠毒素大肠杆菌(ETEC)不耐热肠毒素2型(LT2)毒性的关键氨基酸及其突变重组蛋白的免疫原性,本研究扩增了 LT2编码基因elt2,并采用重叠延伸PCR(SOEPCR)方法分别对其A亚基进行R5K、H42A、S59K、V95K、Y102K和E110K的单突变,将elt2及其6个突变基因分别双酶切后克隆于pET-30a中构建重组大肠杆菌 pET-30a-elt2/BL21、pET-30a-R5K/BL21、pET-30a-H42A/BL21、pET-30a-S59K/BL21、pET-30a-V95K/BL21、pET-30a-Y102K/BL21、pET-30a-E110K/BL21,经 IPTG 诱导表达 了重组 LT2(rLT2)及其突变重组蛋白mrLT2-R5K、mrLT2-H42A、mrLT2-S59K、mrLT2-V95K、mrLT2-Y102K、mrLT2-E110K;利用细胞毒性试验和小鼠致病性试验比较了 rLT2和突变重组蛋白对小鼠肾上腺皮质瘤(Y1)细胞的毒性作用及对小鼠的致病性,并将rLT2和mrLT2-V95K作为免疫原接种小鼠检测其对小鼠的免疫原性.结果显示,突变重组蛋白对Y1细胞的毒性作用均弱于rLT2,其中mrLT2-V95K对Y1细胞的毒性作用最弱为1.145×101 TCID50/0.1 mL;rLT2及该突变重组蛋白对小鼠均无致病性,表明小鼠也不适合用于LT2的致病性检测.mrLT2-V95K免疫BALB/c小鼠的血清特异性IgG抗体效价和对rLT2的中和抗体效价分别为1∶102 400和1∶32,与rLT2的免疫原性无显著差异.本研究首次证实LT2 A亚基的aa95对LT2细胞毒性作用的影响较明显,其突变重组蛋白具有良好的免疫原性,为大肠杆菌减毒疫苗研究提供了重要科学信息.
文献关键词：
产肠毒素大肠杆菌;不耐热肠毒素2型;定点突变;重组蛋白;免疫原性
中图分类号：
作者姓名：
石博;侯美佳;孙思萌;刘嘉利;董秀梅;杨巍;张萍;师东方
作者机构：
东北农业大学动物医学学院,黑龙江 哈尔滨 150030;农业部动物疫病病原生物学东北科学观测实验站,黑龙江 哈尔滨 150030
文献出处：
引用格式：
[1]石博;侯美佳;孙思萌;刘嘉利;董秀梅;杨巍;张萍;师东方-.影响大肠杆菌不耐热肠毒素2型毒性的氨基酸初步筛选)[J].中国预防兽医学报,2022(05):477-483
A类：
elt2,SOEPCR,R5K,H42A,S59K,V95K,Y102K,E110K,rLT2,mrLT2,aa95
B类：
不耐,耐热,热肠,初步筛选,探究影响,产肠毒素大肠杆菌,ETEC,变重,重组蛋白,免疫原性,编码基因,亚基,突变基因,双酶,pET,30a,BL21,IPTG,诱导表达,细胞毒性试验,小鼠致病性试验,肾上腺皮质,最弱,TCID50,BALB,IgG,抗体效价,中和抗体,细胞毒性作用,减毒疫苗,疫苗研究,科学信息,定点突变
AB值：
0.134161
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