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抗禽流感病毒(H5N1)入胞单分子抗体过表达慢病毒载体的构建及其稳转细胞株的建立
文献摘要：
构建过表达抗禽流感病毒(H5N1)M1蛋白入胞单分子抗体(TAT-ScFv-mFc)的慢病毒载体,筛选获得稳定表达TAT-ScFv-mFc的HEK293T稳转细胞株.PCR扩增目的基因,将其插入质粒pLVX-mCMV-ZsGreen1-Puro中,构建pLVX-TAT-ScFv-mFc-ZsGreen1-Puro慢病毒过表达质粒,对重组质粒进行慢病毒包装后使用转染试剂复合物转染HEK293T细胞系,并使用嘌呤霉素(Puro)筛选阳性表达细胞,经过扩大培养及裂解后,以ProteinG纯化目的蛋白并对蛋白纯品进行鉴定.Western blot检测结果显示,成功获得了稳定表达TAT-ScFv-mFc的HEK293T细胞株.ELISA、SDS-PAGE、BCA结果显示成功获得预期目的蛋白2 mL(0.39 g/L).结果表明,本研究成功建立了稳定表达抗H5N1病毒抗体的293T细胞系,为进一步研究TAT-ScFv-mFc的功能结构奠定了基础,也同时为真核表达系统的抗体制备研究提供了参考依据.
文献关键词：
单分子抗体;慢病毒载体;Western blot;转染
中图分类号：
作者姓名：
王瑜;孙赫;岳玉环;吴广谋;张国利;邱月;蔄弘扬;田园;李泽鸿
作者机构：
吉林农业大学生命科学学院,吉林长春130117;中国农业科学院长春兽医研究所生物技术应用研究室,吉林长春130122
文献出处：
引用格式：
[1]王瑜;孙赫;岳玉环;吴广谋;张国利;邱月;蔄弘扬;田园;李泽鸿-.抗禽流感病毒(H5N1)入胞单分子抗体过表达慢病毒载体的构建及其稳转细胞株的建立)[J].中国兽医学报,2022(09):1769-1774
A类：
单分子抗体,mFc,ProteinG
B类：
禽流感病毒,H5N1,慢病毒载体,稳转细胞株,M1,TAT,ScFv,稳定表达,HEK293T,目的基因,pLVX,mCMV,ZsGreen1,Puro,过表达质粒,重组质粒,慢病毒包装,转染,复合物,细胞系,嘌呤霉素,阳性表达,扩大培养,目的蛋白,blot,SDS,PAGE,BCA,预期目的,功能结构,真核表达,表达系统,抗体制备
AB值：
0.272117
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