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N9亚型禽流感病毒NA蛋白在昆虫细胞中的表达与鉴定
文献摘要：
为了表达具有反应原性的N9亚型禽流感病毒(AIV)神经氨酸酶(NA)蛋白,本研究将DK/HuN/S11670/2015(H11N9)株NA基因克隆至杆状病毒转移载体中,构建重组转移载体pFastBacHT A-N9并经PCR和测序鉴定后转化DH10Bac感受态细胞,经PCR鉴定获得了重组杆粒rBacmid-N9,转染昆虫细胞sf21获得重组杆状病毒rBaculovirus-N9.将获得的P3代重组杆状病毒感染sf21细胞后经间接免疫荧光试验(IFA)检测N9蛋白的表达和定位,采用western blot鉴定N9蛋白的反应原性.将杆状病毒表达的重组N9蛋白包被ELISA酶标板,初步建立间接ELISA方法,利用该方法分别检测N9蛋白抗体阳性鸡血清和阴性鸡血清.IFA和western blot结果显示,N9蛋白正确表达且主要锚定在细胞膜上,表达的N9蛋白可以与鼠源N9蛋白单克隆抗体发生特异性反应.间接ELISA方法结果显示,初步建立的间接ELISA方法可以检测鸡血清中的N9抗体.上述结果表明,经杆状病毒—昆虫细胞表达的N9蛋白具有良好的反应原性,为N9AIV检测试剂盒的研发奠定了基础.
文献关键词：
禽流感病毒;神经氨酸酶;N9亚型;昆虫细胞;杆状病毒
中图分类号：
作者姓名：
衡武昌;崔鹏飞;张元成;邢鑫;谷文丽;颜成;孔兴天;王丛丛;彭大新;邓国华;陈化兰
作者机构：
扬州大学兽医学院,江苏 扬州 225009;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室,黑龙江 哈尔滨 150069
文献出处：
引用格式：
[1]衡武昌;崔鹏飞;张元成;邢鑫;谷文丽;颜成;孔兴天;王丛丛;彭大新;邓国华;陈化兰-.N9亚型禽流感病毒NA蛋白在昆虫细胞中的表达与鉴定)[J].中国预防兽医学报,2022(07):777-781
A类：
S11670,H11N9,pFastBacHT,rBacmid,sf21,rBaculovirus,N9AIV
B类：
禽流感病毒,NA,反应原性,神经氨酸酶,DK,HuN,基因克隆,移载,DH10Bac,感受态,转染,重组杆状病毒,P3,间接免疫荧光试验,IFA,western,blot,杆状病毒表达,白包,包被,体阳,鸡血,锚定,细胞膜,单克隆抗体,昆虫细胞表达,检测试剂盒
AB值：
0.194098
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