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细胞信号肽酶复合体亚基1与牛病毒性腹泻病毒复制的相关性分析
文献摘要：
旨在探明信号肽酶复合体亚基1(signal peptidase complex subunit 1,SPCS1)影响牛病毒性腹泻病毒(bo-vine viral diarrhea virus,BVDV)复制的作用.使用Benchling和CHOPCHOP等平台设计靶向SPCS1基因的sgRNA,克隆至慢病毒载体lentiCRISPR v2,连同包装质粒pSPAX2和pMD2.G转染至人胚肾细胞HEK-293T中,包装慢病毒并感染MDBK细胞,用嘌呤霉素筛选5代后获得敲低SPCS1蛋白后稳定表达的细胞,用Western blot检测SPCS1蛋白表达的情况;使用荧光定量PCR和免疫荧光分析检测BVDV感染SPCS1蛋白敲低细胞不同时间后 5'非翻译区(untranslated region,UTR)mRNA 的水平和双链 RNA(double-stranded,dsRNA)积累,利用倒置显微镜观察BVDV致细胞病变(cytopathic effect,CPE)情况,根据Reed-Muench方法测定病毒滴度变化情况.结果:Western blot检测SPCS1蛋白表达量明显下降,成功构建SPCS1敲低(knockdown,KD)细胞;BVDV感染SPCS1 KD细胞后与对照Scramble相比,BVDV 5'UTR mRNA水平和dsRNA量均显著性降低(P＜0.01),CPE现象推迟并减弱,子代病毒滴度显著性下降(P＜0.01),最高降低95.8％.SPCS1敲低后显著性影响BVDV复制,为BVDV防控新技术的建立提供理论依据.
文献关键词：
信号肽酶复合体亚基1;牛病毒性腹泻病毒;5’非翻译区;双链RNA;复制
中图分类号：
作者姓名：
史慧君;董文丽;郭妍婷;袁圆圆;陈俊贞;杨莉;冉多良;付强
作者机构：
新疆农业大学动物医学学院,乌鲁木齐830052
文献出处：
引用格式：
[1]史慧君;董文丽;郭妍婷;袁圆圆;陈俊贞;杨莉;冉多良;付强-.细胞信号肽酶复合体亚基1与牛病毒性腹泻病毒复制的相关性分析)[J].畜牧兽医学报,2022(06):1870-1876
A类：
SPCS1,Benchling,pSPAX2
B类：
细胞信号,信号肽,肽酶,复合体,亚基,牛病毒性腹泻病毒,病毒复制,signal,peptidase,complex,subunit,bo,vine,viral,diarrhea,virus,BVDV,CHOPCHOP,平台设计,sgRNA,慢病毒载体,lentiCRISPR,v2,连同,质粒,pMD2,转染,人胚,胚肾,肾细胞,HEK,293T,MDBK,嘌呤霉素,敲低,稳定表达,blot,免疫荧光分析,分析检测,翻译区,untranslated,region,UTR,双链,double,stranded,dsRNA,倒置,致细胞病变,cytopathic,effect,CPE,Reed,Muench,病毒滴度,knockdown,KD,Scramble,推迟,子代病毒
AB值：
0.362359
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