本实验室前期通过质谱分析筛选到宿主因子II型角蛋白2(KRT2),推测其可能与流感病毒复制相关.为进一步研究KRT2对流感病毒复制的影响,本研究将真核表达质粒pCAGGS-KRT2-Myc转染至HEK293T细胞24 h后,感染A/WSN/1933(H1N1)株病毒,采用噬斑滴定、western blot及激光共聚焦技术检测过表达KTR2蛋白对流感病毒复制影响,结果显示,过表达KRT2蛋白后流感病毒滴度和NP蛋白表达均下降;激光共聚焦试验检测结果显示,过表达KRT2蛋白后,流感病毒复制早期NP蛋白向细胞核内的聚积受到了抑制.针对KRT2基因设计特异性siRNA-1/2,转染A549细胞后采用细胞活力检测试剂盒检测下调KRT2蛋白表达后对A549细胞活力影响,进一步利用荧光定量PCR方法检测干扰效率,筛选最佳siRNA,结果显示,与对照siRNA相比,KRT2特异性siRNA处理不影响A549细胞活力,且siRNA-2能更有效降低KRT2的表达.以A/WSN/1933(H1N1)株病毒感染siRNA-2转染后的A549细胞,采用噬斑滴定、western blot及激光共聚焦技术检测siRNA-2干扰下调KTR2蛋白表达对流感病毒复制影响,上述试验结果均显示,KRT2表达下调后病毒滴度和NP蛋白表达均显著提高;激光共聚焦试验结果显示,下调KRT2蛋白表达后,流感病毒在复制早期阶段受到了抑制.本研究结果首次表明,KRT2是一种负调控流感病毒复制的宿主因子.本研究丰富了流感病毒与宿主因子互作的网络,也深化了对宿主因子影响流感病毒复制机制的认知.

角蛋白2;流感病毒;病毒复制

王一涵;石文军;李奇兵;胡玉珍;赵玉辉;王广文;严娅;姜丽;陈化兰;李呈军

中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业农村部动物流感重点开放实验室,黑龙江 哈尔滨 150069

中国预防兽医学报

[1]王一涵;石文军;李奇兵;胡玉珍;赵玉辉;王广文;严娅;姜丽;陈化兰;李呈军-.宿主因子KRT2影响A型流感病毒复制的研究)[J].中国预防兽医学报,2022(03):237-242

KRT2,KTR2

宿主因子,流感病毒,病毒复制,质谱分析,II,角蛋白,真核表达质粒,pCAGGS,Myc,转染,HEK293T,WSN,H1N1,噬斑,滴定,western,blot,共聚,过表达,病毒滴度,NP,试验检测,细胞核,聚积,siRNA,A549,细胞活力,检测试剂盒,早期阶段,负调控,控流,复制机制

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