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猪圆环病毒3型Cap蛋白的表达与鉴定
文献摘要：
为了表达猪圆环病毒3型(porcine circovirus type3,PCV3)Cap蛋白,按照昆虫细胞密码子偏嗜性对ORF2基因进行优化并在N端加上His标签基因,合成的ORF2基因片段克隆入pFastBac Dual杆状病毒穿梭载体;将重组质粒转化大肠杆菌DH10-Bac感受态后通过蓝白斑筛选获得重组杆粒Bacmid-C2;将重组杆粒转染至SF9细胞5 d后收集细胞上清液;连续传代3次观察细胞病变.将接毒后的SF9细胞样通过Western blot及间接免疫荧光(IFA)进行Cap蛋白表达的鉴定.利用蔗糖密度梯度离心对病毒样颗粒的Cap蛋白纯化后进行透射电镜观察.结果显示:SDS-PAGE和Western blot检测发现重组杆状病毒在昆虫细胞中能够有效表达Cap蛋白,且与His-tag单抗及PCV3阳性血清发生特异性反应;IFA进一步鉴定感染了重组病毒的昆虫细胞与His单抗产生特异性荧光;透射电镜可以明显观察到14～17 nm左右形态规则的病毒样颗粒(VLPs).PCV3 Cap蛋白的成功表达和鉴定将为研究Cap蛋白的免疫原性和空间结构奠定基础,也为探讨开发PCV3的亚单位疫苗提供了可能.
文献关键词：
猪圆环病毒3型;Cap蛋白;杆状病毒;病毒样颗粒
中图分类号：
作者姓名：
张超;安家慧;于栋;祝可心;叶洋;杨凯一;李玉峰
作者机构：
南京农业大学动物医学院,江苏南京 210095
文献出处：
引用格式：
[1]张超;安家慧;于栋;祝可心;叶洋;杨凯一;李玉峰-.猪圆环病毒3型Cap蛋白的表达与鉴定)[J].畜牧与兽医,2022(06):85-90
A类：
type3,DH10,SF9
B类：
猪圆环病毒,Cap,porcine,circovirus,PCV3,昆虫细胞,密码子,ORF2,His,pFastBac,Dual,穿梭,重组质粒,大肠杆菌,感受态,蓝白斑筛选,Bacmid,C2,转染,上清液,连续传代,细胞病变,blot,间接免疫荧光,IFA,蔗糖,密度梯度,病毒样颗粒,蛋白纯化,透射电镜,电镜观察,SDS,PAGE,重组杆状病毒,有效表达,tag,单抗,阳性血清,重组病毒,形态规则,VLPs,定将,免疫原性,讨开,亚单位疫苗
AB值：
0.353092
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