典型文献
基于单个B淋巴细胞扩增技术筛选马传染性贫血病毒的囊膜蛋白单克隆抗体
文献摘要：
马传染性贫血病毒(EIAV)囊膜蛋白(Env)是参与病毒感染过程中的关键蛋白,由表面蛋白(Gp90)及跨膜蛋白(Gp45)组成,Env蛋白在介导病毒粘附、细胞间融合、疾病传播等方面发挥重要作用.为了通过单个B淋巴细胞扩增技术获得Env特异性单克隆抗体(MAb),本研究利用密码子优化后的Gp90基因构建了重组质粒pcDNA3.1-s-gp90-His,按常规方法将该重组质粒免疫小鼠6次后分离脾细胞,利用荧光激活细胞分选(FACS)技术分离免疫小鼠脾细胞中可识别Gp90的单个B淋巴细胞,结果显示,本研究从2×108个小鼠脾细胞中获得890个识别Gp90的单个B淋巴细胞.通过特异性引物以单个B淋巴细胞的基因组cDNA为模板扩增抗体重链(Ig VH)和轻链(Ig VL)的可变区基因,利用重叠延伸PCR方法分别将重链(Ig VH)和轻链(Ig VL)可变区基因克隆至pcDNA3.1中,测序鉴定结果显示分别正确构建了27对匹配的pcDNA3.1-VH和pcDNA3.1-VL表达质粒,将这27对匹配的表达质粒分别按照pcDNA3.1-VH:pcDNA3.1-VL=1:1的比例共转染至HEK293F细胞,收获细胞上清,经Protein A纯化获得Gp90 MAb.通过ELISA和western blot两种方法对纯化的Gp90 MAb进行鉴定,结果显示获得了27株可匹配的抗体基因对,经表达后有4株MAb可与Gp90蛋白结合,且可以识别Gp90蛋白的天然构象.本研究首次采用单个B淋巴细胞扩增技术对Gp90 MAb进行了筛选,获得的Gp90 MAb为Env蛋白检测方法的研究提供了物质基础,同时为深入研究Env蛋白的功能奠定了基础.
文献关键词：
马传染性贫血病毒;囊膜蛋白;单个B淋巴细胞扩增;单克隆抗体
中图分类号：
作者姓名：
张佳琦;王亚玉;郭兴;林跃智;廖化新;王晓钧
作者机构：
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/马传染病和慢病毒病研究创新团队,黑龙江 哈尔滨 150069;暨南大学生命科学技术学院细胞生物学系,广东 广州 510632
文献出处：
引用格式：
[1]张佳琦;王亚玉;郭兴;林跃智;廖化新;王晓钧-.基于单个B淋巴细胞扩增技术筛选马传染性贫血病毒的囊膜蛋白单克隆抗体)[J].中国预防兽医学报,2022(03):307-313
A类：
马传染性贫血病毒,EIAV,Gp90,Gp45,gp90,HEK293F
B类：
细胞扩增,技术筛选,囊膜蛋白,单克隆抗体,Env,关键蛋白,表面蛋白,跨膜蛋白,粘附,疾病传播,技术获得,MAb,研究利用,密码子优化,重组质粒,pcDNA3,His,常规方法,质粒免疫,脾细胞,光激活,活细胞,细胞分选,FACS,特异性引物,Ig,VH,轻链,VL,可变区,基因克隆,共转染,上清,Protein,western,blot,蛋白结合,构象,蛋白检测
AB值：
0.206471
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