典型文献
鼠肝炎病毒A59毒株感染性克隆的构建及应用
文献摘要：
鼠肝炎病毒(mouse hepatitis virus,MHV)是研究冠状病毒的模式病毒,但传统的病原学研究方法局限于自然界分离的病毒,不利于研究的开展.反向遗传操作系统可快速获得研究所需的重组病毒,为研究MHV及其他冠状病毒的基因组功能开辟了新途径.本研究通过反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)将MHV的原始毒株A59全长基因组分成6个片段进行扩增,分别克隆到质粒载体,经酶切、体外连接和转录获得全长基因组RNA,然后电转细胞并进行病毒扩增.结果显示,重组病毒rA59与原始毒株的复制特性相似,其为研究MHV的生物学特性提供了实验工具.为方便检测病毒的复制水平,在病毒基因组开放阅读框4(open reading frame 4,ORF4)内分别插入绿色荧光蛋白ZsGreen(Zoanthus sp.green fluorescent protein)和荧光素酶Nluc(NanoLuc luciferase)报告基因,获得rA59-ZsGreen和rA59-Nluc重组报告病毒.结果显示,报告病毒所携带的报告基因并不影响病毒复制,可很好地反映病毒的复制特性.使用这两种病毒验证瑞德西韦(remdesivir)的抗病毒活性,分别检测药物处理后病毒的荧光亮度和荧光素酶活性.结果表明,rA59-ZsGreen和rA59-Nluc重组报告病毒适用于高通量药物筛选,具有重要的应用前景.综上所述,本研究成功建立了MHV A59毒株六质粒反向遗传操作系统,为研究MHV的生物学特性和测试抗病毒药物等提供了有力的工具.
文献关键词：
鼠肝炎病毒;感染性克隆;病毒拯救;报告病毒
中图分类号：
作者姓名：
于尹;冯飞;马艳龙;朱云凯;叶荣;张荣
作者机构：
复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系,教育部/卫健委/医科院医学分子病毒学重点实验室,上海 200032
文献出处：
引用格式：
[1]于尹;冯飞;马艳龙;朱云凯;叶荣;张荣-.鼠肝炎病毒A59毒株感染性克隆的构建及应用)[J].微生物与感染,2022(03):139-147
A类：
鼠肝炎病毒,A59,rA59,Zoanthus,Nluc
B类：
毒株,感染性克隆,构建及应用,mouse,hepatitis,virus,MHV,病原学研究,界分,反向遗传,遗传操作,操作系统,获得研究,重组病毒,能开,反转录聚合酶链式反应,reverse,transcription,polymerase,chain,reaction,全长,别克,质粒,外连接,生物学特性,实验工具,复制水平,病毒基因组,开放阅读框,open,reading,frame,ORF4,绿色荧光蛋白,ZsGreen,sp,green,fluorescent,protein,NanoLuc,luciferase,报告基因,报告病毒,病毒复制,瑞德西韦,remdesivir,抗病毒活性,光亮度,荧光素酶活性,高通量药物筛选,综上所述,抗病毒药物,病毒拯救
AB值：
0.315114
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