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小鼠肝炎病毒逆转录-重组酶聚合酶扩增检测方法的建立、验证及应用
文献摘要：
目的 建立小鼠肝炎病毒(mouse hepatitis virus,MHV)的逆转录-重组酶聚合酶扩增(reverse-trancription recom-binase ploymerase amplification,RT-RPA)检测方法.方法 以 GenBank 中登录的 MHV-FJ 株(FJ6647223)M 基因保守区段(82～317 bp)为靶基因,设计合成6对RPA扩增引物(M-MHV-1～6),筛选1对最适引物,同时优化反应温度(31、33、35、37、39、41℃)和时间(20、25、30、35 min),并验证该方法的特异性和敏感性.采用优化方法检测32份野生田鼠肝脏组织样本,并与RT-PCR法检测结果进行对比.结果 筛选最适引物为M-MHV-2,最适反应温度和时间分别为37℃和30 min.该方法的检测下限为4.75×102 copies/μL,对鼠肺炎病毒(Pneumonia virus of mice,PVM)、仙台病毒(Sendai virus,SV)、汉坦病毒(Hantaan virus,HV)、鼠细小病毒(minute virus of mice,MVM)、呼肠弧病毒Ⅲ型(reovirus type Ⅲ,Reo Ⅲ)无交叉反应.32份野生田鼠肝脏组织样本中,检测出阳性样本1份,检出率为3.13％(1/32),与RT-PCR检测结果一致.结论 建立了 MHV的RT-RPA检测方法,该方法的特异性及灵敏性良好,且具有反应迅速、操作简单等优点.本研究为MHV快速检测方法的进一步研发奠定了基础.
文献关键词：
小鼠肝炎病毒;重组酶聚合酶;优化;验证
中图分类号：
作者姓名：
闫雪;李明;张旭;张振;王霄;马跃宇;马鸣潇;费东亮
作者机构：
锦州医科大学畜牧兽医学院,辽宁锦州121000;锦州市疾病预防控制中心,辽宁锦州121000
文献出处：
引用格式：
[1]闫雪;李明;张旭;张振;王霄;马跃宇;马鸣潇;费东亮-.小鼠肝炎病毒逆转录-重组酶聚合酶扩增检测方法的建立、验证及应用)[J].中国生物制品学杂志,2022(06):729-733
A类：
小鼠肝炎病毒,鼠肝炎病毒,trancription,binase,ploymerase,FJ6647223,Reo
B类：
逆转录,重组酶聚合酶扩增,mouse,hepatitis,MHV,reverse,recom,amplification,RPA,GenBank,登录,区段,bp,靶基因,设计合成,扩增引物,同时优化,优化反应,反应温度,田鼠,肝脏组织,温度和时间,检测下限,copies,Pneumonia,mice,PVM,仙台病毒,Sendai,SV,汉坦病毒,Hantaan,细小病毒,minute,MVM,呼肠,reovirus,type,交叉反应,阳性样本,灵敏性,快速检测方法
AB值：
0.339601
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