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真核重组荧光质粒pEGFP-N1-Et HP的构建及高效转染细胞的筛选
文献摘要：
为了构建真核重组荧光质粒pEGFP-N1-Et HP,并筛选出Lipofectamine 2000介导的高效转染细胞,本试验将柔嫩艾美尔球虫假定蛋白(Et HP)基因扩增后插入真核荧光表达载体pEGFP-N1,构建真核重组荧光质粒pEGFP-N1-Et HP;测序成功后,用 Lipofectamine 2000 介导 pEGFP-N1-Et HP 转染 4 种细胞即 Vero、DF-1、BHK、HD-11;用 Western blot 检测确定 Et HP蛋白在4种细胞内的表达,并观察转染48 h后荧光表达情况,计算5个视野内带有绿色荧光的细胞数占细胞总数的比例,从而比较质粒与Lipofectamine 2000比例不同时4种细胞的转染效率[转染效率/％=(带有绿色荧光的细胞数/细胞总数)×100％].测序结果显示,pEGFP-N1-Et HP构建成功.Western blot检测显示,EtHP蛋白在4种细胞中均成功表达;荧光显微镜观察到4种细胞转染后48 h均出现绿色荧光,表明重组质粒pEGFP-N1-Et HP成功表达.通过转染效率的比较,发现DF-1细胞转染效率均显著高于其他细胞(P＜0.05);当质粒与Lipofectamine 2000比例为1∶ 2时,DF-1细胞转染效率最高.因此,重组质粒pEGFP-N1-Et HP可高效转染DF-1细胞.本试验结果为进一步探索Et HP蛋白在柔嫩艾美尔球虫入侵寄生过程中的生物学功能提供有效的试验工具.
文献关键词：
柔嫩艾美尔球虫假定蛋白;真核重组荧光质粒;DF-1细胞;转染效率
中图分类号：
作者姓名：
郭许情;王黎霞;张榕珍;张健;张天宇;石梦云;王诗琪;赵小涵;张建军;安健
作者机构：
北京农学院动物科学技术学院,北京昌平102206;北京农业职业学院畜牧兽医系,北京房山102442
文献出处：
引用格式：
[1]郭许情;王黎霞;张榕珍;张健;张天宇;石梦云;王诗琪;赵小涵;张建军;安健-.真核重组荧光质粒pEGFP-N1-Et HP的构建及高效转染细胞的筛选)[J].中国兽医杂志,2022(04):45-48,55
A类：
真核重组荧光质粒,柔嫩艾美尔球虫假定蛋白,EtHP
B类：
pEGFP,N1,Lipofectamine,基因扩增,光表,表达载体,Vero,DF,BHK,HD,blot,数占,转染效率,荧光显微镜观察,细胞转染,重组质粒,寄生,生物学功能
AB值：
0.11977
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