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鸭肠炎病毒疫苗株UL41和UL40基因间隔区作为其复制非必需区的鉴定
文献摘要：
为探寻鸭肠炎病毒(DEV)基因组中可插入外源基因的复制非必需区,本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,构建重组质粒pX459-ul4140和含有红色荧光蛋白(RFP)表达框架的穿梭片段UL41-RFP-UL40,转染后拯救重组病毒,并对其进行噬斑纯化.通过PCR和荧光显微镜观察对重组病毒进行鉴定,结果显示,经拯救得到表达RFP的重组病毒rDEV-ul4140RFP;所有代次的rDEV-ul4140RFP在显微镜下均能观察到红色荧光,表明重组病毒中的RFP基因稳定存在.将rDEV-ul4140RFP和亲本病毒DEV疫苗株接种鸡胚成纤维细胞(CEFs)后,收集24 h、48 h、72 h、96 h的细胞和上清,检测TCID50并绘制生长曲线.结果显示,rDEV-ul4140RFP在CEF中的生长曲线和亲本DEV疫苗株无显著差异.利用SPF鸭对rDEV-ul4140RFP的免疫保护效果进行评价.攻毒保护实验结果显示,rDEV-ul4140RFP和亲本病毒DEV疫苗株均能对SPF鸭提供100％的免疫保护.本研究结果证实DEV基因组UL41和UL40基因间隔区可作为外源基因的插入位点,为以DEV为载体构建相关重组疫苗提供参考依据.
文献关键词：
鸭肠炎病毒;CRISPR/Cas9;复制非必需区
中图分类号：
作者姓名：
刘静;赵玉博;焦晨晨;陈普成;胡玉珍;姜永萍;陈化兰;柳金雄
作者机构：
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部动物流感重点开放实验室,黑龙江 哈尔滨 150069
文献出处：
引用格式：
[1]刘静;赵玉博;焦晨晨;陈普成;胡玉珍;姜永萍;陈化兰;柳金雄-.鸭肠炎病毒疫苗株UL41和UL40基因间隔区作为其复制非必需区的鉴定)[J].中国预防兽医学报,2022(09):996-1000
A类：
UL41,UL40,复制非必需区,非必需区,pX459,ul4140,rDEV,ul4140RFP,CEFs
B类：
鸭肠炎病毒,病毒疫苗,疫苗株,基因间隔区,外源基因,研究利用,CRISPR,Cas9,基因编辑技术,重组质粒,红色荧光蛋白,表达框架,穿梭,转染,拯救,重组病毒,噬斑,荧光显微镜观察,显微镜下,定存,和亲,亲本,本病,种鸡,鸡胚成纤维细胞,上清,TCID50,生长曲线,SPF,免疫保护效果,攻毒保护,插入位点,载体构建,重组疫苗
AB值：
0.208538
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