典型文献
小亚璃眼蜱CPL截短基因的多克隆抗体制备及其应用研究
文献摘要：
组织蛋白酶L(CPL)是半胱氨酸蛋白水解酶,属于木瓜蛋白酶家族,参与蜱对血红蛋白降解与消化,是一种潜在的抗蜱疫苗候选抗原.为了制备小亚璃眼蜱(H.anatolicum)CPL多克隆抗体,并对其初步应用,本研究利用PCR方法扩增CPL截短基因(HanCPL)后构建pET-28a-HanCPL和pEGFP-C3-HanCPL质粒,pET-28a-HanCPL经IPTG诱导后通过SDS-PAGE检测重组HanCPL蛋白(rHanCPL)的表达,结果显示,正确构建了 pET-28a-HanCPL和pEGFP-C3-HanCPL质粒;rHanCPL以包涵体形式表达,分子量大小约为27 ku,可以被兔抗His tag抗体特异性识别;利用亲和层析柱和尿素透析法纯化rHanCPL后经western blot鉴定纯化效果,并测浓度后免疫新西兰兔,制备rHanCPL多克隆抗体,经western blot检测rHanCPL的反应性,采用间接ELISA测定多克隆抗体的效价.结果显示,rHanCPL纯化效果较好,浓度为3 mg/mL;rHanCPL可以与其多克隆抗体发生特异反应,且制备的rHanCPL多克隆抗体效价高达1∶204 800,可用于后续试验.利用制备的rHanCPL多克隆抗体作为一抗,通过免疫组化试验检测天然CPL在H.anatolicum中的定位,结果显示,天然CPL蛋白可以被rHanCPL多克隆抗体特异性识别,且其定位于H.anatolicum中的肠上皮细胞;另外将pEGFP-C3-HanCPL质粒转染至HEK-293T中,以制备的rHanCPL多克隆抗体作为一抗,使用western blot和IFA方法检测重组蛋白(EGFP-HanCPL)的表达及定位情况,结果显示EGFP-HanCPL蛋白也可与rHanCPL多克隆抗体特异性结合,其分子量约为46 ku,其主要定位于细胞质.本研究利用表达的rHanCPL制备了 rHanCPL多克隆抗体,并初步将该多克隆抗体用于CPL的相关研究,为后续抗蜱疫苗蛋白抗原的筛选提供参考依据.
文献关键词：
小亚璃眼蜱;组织蛋白酶L;多克隆抗体;免疫组化
中图分类号：
作者姓名：
翟雪洁;郝蕴伟;阿力木江·加帕尔;宋瑞其;诺明达来;蒋倩;何文文;郑会珍;巴音查汗
作者机构：
新疆农业大学动物医学学院,新疆 乌鲁木齐 830052;石河子大学医学院基础医学系,新疆 石河子 832003
文献出处：
引用格式：
[1]翟雪洁;郝蕴伟;阿力木江·加帕尔;宋瑞其;诺明达来;蒋倩;何文文;郑会珍;巴音查汗-.小亚璃眼蜱CPL截短基因的多克隆抗体制备及其应用研究)[J].中国预防兽医学报,2022(06):655-660
A类：
抗蜱疫苗,HanCPL,rHanCPL
B类：
小亚璃眼蜱,多克隆抗体制备,组织蛋白酶,半胱氨酸蛋白,蛋白水解,水解酶,木瓜蛋白酶,蛋白降解,候选抗原,anatolicum,初步应用,研究利用,pET,28a,pEGFP,C3,IPTG,SDS,PAGE,包涵体,分子量,ku,His,tag,抗体特异性,特异性识别,亲和层析,层析柱,透析法,western,blot,新西兰兔,反应性,抗体效价,价高,免疫组化,试验检测,肠上皮细胞,质粒转染,HEK,293T,IFA,重组蛋白,特异性结合,细胞质,体用
AB值：
0.193523
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