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猪源含缬酪肽蛋白(VCP)的真核表达及其活性鉴定
文献摘要：
含缬酪肽蛋白(VCP)作为细胞中的重要活性蛋白,参与多种细胞过程,也在许多病毒的感染过程中发挥重要作用.为了探究VCP对猪瘟病毒(CSFV)、日本脑炎病毒(JEV)和伪狂犬病病毒(PRV)复制的影响,试验扩增了猪源VCP的基因片段,并将其连接到pEGFP-C1载体中.经双酶切鉴定结合基因测序结果,成功构建真核表达重组载体pEGFP-VCP.通过间接免疫荧光(IFA)和蛋白免疫印迹(Western blot)证实,重组质粒EGFP-VCP能在猪肾细胞(PK-15)中成功表达.而在表达pEGFP-VCP的细胞中分别感染CSFV、JEV和PRV后,通过Western blot、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、半数细胞感染量(TCID50)以及IFA试验,检测到过表达VCP能够明显促进CSFV、JEV以及PRV病毒蛋白的表达,提高胞内病毒核酸的含量,并且使胞外病毒滴度增加,极大地促进了 3种病毒在PK-15细胞中的复制,为深入研究VCP促进多种病毒感染宿主细胞的分子机制奠定了理论基础.
文献关键词：
含缬酪肽蛋白;猪瘟病毒;日本脑炎病毒;伪狂犬病毒;猪肾细胞;复制
中图分类号：
作者姓名：
孙睿聪;胡家欢;李晓晗;陈婧;周斌
作者机构：
南京农业大学动物医学院,江苏南京 210095;农业农村部动物细菌学重点实验室,江苏南京 210095
文献出处：
引用格式：
[1]孙睿聪;胡家欢;李晓晗;陈婧;周斌-.猪源含缬酪肽蛋白(VCP)的真核表达及其活性鉴定)[J].畜牧与兽医,2022(08):66-72
A类：
含缬酪肽蛋白
B类：
猪源,VCP,真核表达,活性鉴定,活性蛋白,多病,猪瘟病毒,CSFV,日本脑炎病毒,JEV,伪狂犬病病毒,PRV,接到,pEGFP,C1,双酶,基因测序,重组载体,间接免疫荧光,IFA,蛋白免疫印迹,blot,重组质粒,猪肾细胞,PK,qPCR,半数,细胞感染,TCID50,过表达,病毒蛋白,病毒核酸,病毒滴度,宿主,主细胞,伪狂犬病毒
AB值：
0.302864
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