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链间二硫键增强抗前胃泌素释放肽单链抗体稳定性
文献摘要：
前胃泌素释放肽(pro-gastrin-releasing peptide,ProGRP)是小细胞肺癌的特异性标志物,131I标记的抗ProGRP单克隆抗体对小细胞肺癌具有明显的抑制作用.抗ProGRP单链抗体的制备具有重要的应用前景.本研究以抗ProGRP单克隆细胞株E-B5 cDNA为模板,扩增获得VH和VL序列,并对其进行序列比对和同源建模,分析引入链间二硫键的突变位点.通过基因合成获得单链抗体ScfvProGRP和单链二硫键稳定抗体SdsfvProGRP基因,并将其分别构建在质粒pET-28a,获得重组表达质粒pET28a-His-ScfvProGRP和pET28a-His-SdsfvProGRP.重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达出的ScFvProGRP和SdsFvProGRP以包涵体的形式存在.包涵体经变复性后进行纯化,获得ScFvPro-GRP 和 SdsFvProGRP 的纯度分别为 87.38％和 95.73％.酶联免疫吸 附试验(enzyme linked immunosor-bent assay,ELISA)检测显示,0.021 mg/mL ScFvProGRP 和 0.026 mg/mL SdsFvProGRP 可以与抗原 Pro-GRP特异性结合.SdsFvProGRP稳定性高于ScFvProGRP.结果表明,重组表达的抗ProGRP单链抗体识别ProGRP,具有免疫学活性,链间二硫键增强了抗前胃泌素释放肽单链抗体稳定性,研究为ProGRP人源化单链抗体的制备提供了新的数据.
文献关键词：
前胃泌素释放肽;二硫键;单链抗体;原核表达;稳定性
中图分类号：
作者姓名：
郭玉凤;刘佳玉;许静;张婷;张超;孔晓娜;周小林;王伟
作者机构：
中国辐射防护研究院,放射医学与环境医学研究所,太原030006;化学生物学与分子工程教育部重点实验室,山西大学生物技术研究所,太原030006
文献出处：
引用格式：
[1]郭玉凤;刘佳玉;许静;张婷;张超;孔晓娜;周小林;王伟-.链间二硫键增强抗前胃泌素释放肽单链抗体稳定性)[J].中国生物化学与分子生物学报,2022(10):1418-1425
A类：
前胃泌素释放肽,ScfvProGRP,SdsfvProGRP,ScFvProGRP,SdsFvProGRP,ScFvPro
B类：
二硫键,单链抗体,pro,gastrin,releasing,peptide,小细胞肺癌,131I,单克隆抗体,单克隆细胞,细胞株,B5,cDNA,VH,VL,序列比对,同源建模,突变位点,基因合成,建在,质粒,重组表达,pET28a,His,大肠杆菌,BL21,DE3,诱导表达,包涵体,经变,enzyme,linked,immunosor,bent,assay,特异性结合,免疫学,人源化,原核表达
AB值：
0.238883
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