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兔抗鼠MORF4L1 a多克隆抗体的制备与鉴定
文献摘要：
目的 制备兔抗鼠MORF4L1 a变体的多克隆抗体以区分MORF4L1的a、b变体.方法 根据对小鼠MORF4L1 a、b变体差异序列的抗原性、同源性的分析结果,合成MORF4L1 a的N端第52～66位的序列作为抗原肽(15肽,KSAVRPRRSEKSLKT),偶联KLH载体作为抗原免疫家兔,用Dot blot鉴定抗血清的特异性.对特异性良好的1号家兔抗血清进行抗原亲和层析纯化,用间接ELISA测定抗体效价.此外,构建MORF4L1 a、b变体的原核表达质粒和真核表达质粒.利用原核表达系统表达纯化后和在细胞中表达的MORF4L1 a、b蛋白进行Western blot鉴定抗体的特异性.结果 1号免疫兔抗血清能特异性识别多肽;纯化后抗体的效价达到1:512000;成功构建pGEX?4T?2?M4S、pGEX?4T?2?M4L原核表达质粒和pCMV?3Tag?6?M4S、pCMV?3Tag?6?M4L真核表达质粒,并在原核系统和真核系统中成功表达.该抗体能与MORF4L1 a特异结合.结论 成功制备了效价高、特异性较强的兔抗鼠MORF4L1 a抗体,为进一步揭示MORF4L1可变剪接的生物学意义和不同变体的生物学功能奠定了实验基础.
文献关键词：
MORF4L1;多克隆抗体;变体
中图分类号：
作者姓名：
李芳;章元;张业
作者机构：
中国医学科学院基础医学研究所 北京协和医学院基础学院 生物化学与分子生物学系,北京100005;中国医学科学院 北京协和医学院 北京协和医院 神经外科, 北京100730
文献出处：
引用格式：
[1]李芳;章元;张业-.兔抗鼠MORF4L1 a多克隆抗体的制备与鉴定)[J].基础医学与临床,2022(05):726-731
A类：
MORF4L1,KSAVRPRRSEKSLKT,M4S,M4L,3Tag
B类：
多克隆抗体,变体,异序,抗原性,同源性,列作,偶联,KLH,家兔,Dot,blot,兔抗血清,亲和层析,层析纯化,抗体效价,原核表达,真核表达质粒,表达系统,表达纯化,特异性识别,多肽,pGEX,4T,pCMV,价高,可变剪接,生物学意义,生物学功能
AB值：
0.23511
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