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猪圆环病毒3型Cap蛋白在毕赤酵母中的优化表达
文献摘要:
以猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3,PCV3)Cap蛋白为模式抗原,探索病毒衣壳蛋白在毕赤酵母中高效表达的方法.体外构建多拷贝毕赤酵母表达载体,转入GS115感受态细胞后获得含有1、2、4、8拷贝目的基因的毕赤酵母菌株.对上述酵母菌株进行摇瓶发酵,利用SDS-PAGE、Western blot和灰度分析等方法检测目的蛋白表达情况.消除GS-8CAP菌株博来霉素(Zeocin)抗性后获得抗生素敏感型菌株(GS-8CAP-Zeos),向该菌株中继续转入8拷贝酵母表达质粒从而获得GS-16CAP菌株,评估GS-16CAP的目的蛋白产量.结果显示:GS-8CAP菌株目的蛋白产量与GS-1CAP相比提高487.6%;GS-16CAP菌株目的蛋白产量是GS-8CAP的1.64倍,是GS-1CAP的9.47倍;通过与梯度稀释的牛血清白蛋白(BSA)进行蛋白条带比较,评估GS-16CAp菌株目的蛋白产量约为113mg/L.研究表明,多拷贝技术能够有效提高Cap蛋白在毕赤酵母中的产量.本研究将为毕赤酵母高效表达其他病毒衣壳蛋白提供重要参考,并为PCV3亚单位疫苗的开发奠定基础.
文献关键词:
PCV3 Cap;毕赤酵母;重组蛋白产量;多拷贝
中图分类号:
作者姓名:
李丁;李炳坤;武奇;张雪花;梅梅
作者机构:
江苏省农业科学院动物免疫工程研究所,江苏南京 210014;江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏扬州 225009;江苏省食品质量安全重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地,江苏南京 210014;江西农业大学生物科学与工程学院,江西南昌 330045
文献出处:
引用格式:
[1]李丁;李炳坤;武奇;张雪花;梅梅-.猪圆环病毒3型Cap蛋白在毕赤酵母中的优化表达)[J].畜牧与兽医,2022(12):80-86
A类:
贝目,8CAP,Zeocin,Zeos,16CAP,1CAP,16CAp
B类:
猪圆环病毒,Cap,毕赤酵母,porcine,circovirus,type,PCV3,模式抗原,衣壳蛋白,高效表达,体外构建,多拷贝,酵母表达,表达载体,转入,GS115,感受态,目的基因,酵母菌株,摇瓶发酵,SDS,PAGE,blot,灰度,检测目的,目的蛋白,博来霉素,敏感型,中继,质粒,梯度稀释,牛血清白蛋白,BSA,白条,条带,113mg,亚单位疫苗,重组蛋白产量
AB值:
0.283836
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