[目的]在毕赤酵母中构建猫血清白蛋白(feline serum albumin,FSA)表达系统,并探索其最适的基本表达条件,为FSA的生产提供一种新方法.[方法]在GenBank上获取FSA碱基序列,进行密码子优化并合成,将优化的密码子构建到载体pPIC9K上,经PCR和双酶切验证后通过电击转化将重组质粒FSA-pPIC9K转化毕赤酵母GS115,依次经MD平板和G418筛选后进行菌落PCR获得阳性菌株,随机选取阳性菌株经甲醇诱导表达96h后,取表达上清液进行Western blotting验证.选取表达量较高的菌株分别在不同温度(24、26、28和30℃)、pH(4.0、5.0、6.0、7.0和8.0)和甲醇诱导量(其中1组为每24 h添加0.5％,其余4组为每12 h分别添加0.5％、1.0％、1.5％和2.0％)的条件下诱导表达96 h,取表达上清液进行Western blotting验证.[结果]菌落PCR结果显示,获得2条大小分别约为2.3和2.2 kb的目的基因条带和毕赤酵母AOX1基因扩增条带,诱导表达96 h后取表达上清液进行Western blotting验证,在70 ku左右出现特异性条带.通过基本条件优化发现该蛋白在28℃,pH为6.0且每12 h添加0.5％的甲醇条件下表达量较高.[结论]毕赤酵母GS115可稳定表达FSA.

猫血清白蛋白(FSA);毕赤酵母;分泌表达

佛山科学技术学院生命科学与工程学院,佛山528231

[1]赵明明;李星颖;江文康;樊全宝;赖健仪;何诗;何静;白银山;刘璨颖;陈胜锋;陈志胜;张晖;王丙云-.猫血清白蛋白在毕赤酵母中的分泌表达)[J].中国畜牧兽医,2022(03):897-903

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