典型文献
利用单碱基编辑器定点突变猪肌肉生长抑制素基因的研究
文献摘要：
[目的]利用单碱基编辑器在宁乡花猪肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因第2外显子处引入终止密码子,以获得MSTNV基因表达沉默的肾成纤维细胞系,为后期培育MSTN碱基编辑猪奠定基础.[方法]首先在MSTN基因的第2外显子处设计1条单向导RNA(single guide RNA,sgRNA),将其连接至pMLM3636-puro质粒,形成重组表达载体pMLM3636-puro-MSTN,与含有红色荧光碱基编辑器YE1-BE3-FNLS共转入宁乡花猪肾成纤维细胞中,在红色荧光和嘌呤霉素双筛选条件下,挑取单克隆细胞,测序验证后,分析阳性单克隆细胞的蛋白表达情况.[结果]在MSTN基因第2外显子处发生了碱基定点突变,目标位点的氨基酸序列由色氨酸(TGG)转变成终止密码子(TAA),且G→A突变率为5.5％.Western blotting检测结果表明,试验组10号单克隆细胞的MSTN蛋白表达量与野生型相比降低了 60％.[结论]本研究运用单碱基编辑技术在宁乡花猪MSTN基因编码区引入终止密码子,使翻译提前终止,导致蛋白表达量显著降低,为后期MSTN基因碱基编辑猪的生产奠定基础.
文献关键词：
单碱基编辑;宁乡花猪;MSTN基因;终止密码子
中图分类号：
作者姓名：
王晶;朱喆;张鹏;毕延震
作者机构：
中南民族大学生命科学学院,武汉430074;湖北省农业科学院畜牧兽医研究所,动物胚胎工程与分子育种湖北重点实验室,武汉430064
文献出处：
引用格式：
[1]王晶;朱喆;张鹏;毕延震-.利用单碱基编辑器定点突变猪肌肉生长抑制素基因的研究)[J].中国畜牧兽医,2022(08):2880-2887
A类：
MSTNV,pMLM3636,YE1,BE3,FNLS
B类：
单碱基编辑,碱基编辑器,定点突变,猪肌肉,肌肉生长抑制素基因,宁乡花猪,myostatin,外显子,终止密码子,成纤维细胞,细胞系,向导,single,guide,sgRNA,puro,质粒,重组表达,表达载体,红色荧光,转入,嘌呤霉素,单克隆细胞,目标位,氨基酸序列,色氨酸,TGG,转变成,TAA,突变率,blotting,野生型,比降,研究运用,碱基编辑技术,基因编码,编码区,提前终止
AB值：
0.236153
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