[目的]探讨影响鸡长链非编码RNA(long chain noncoding RNA,lncRNA)-骨形态发生蛋白4(bone morphogenetic protein 4,BMP4)启动子转录的因素,并对调控lncRNA-BMP4特异表达的分子机制进行研究.[方法]以鸡肌肉基因组为模板,PCR扩增并克隆鸡lncRNA-BMP4的启动子区,构建lncRNA-BMP4-EFGP载体,对lncRNA-BMP4启动活性进行定性分析;通过染色体5'-末端缺失的方法和双荧光素酶系统检测筛选lncRNA-BMP4启动子核心区域.通过在线工具预测分析调控核心区域的潜在转录因子;利用点突变和双荧光素酶系统筛查真正影响lncRNA-BMP4的转录因子;通过表观修饰验证DNA甲基化、组蛋白乙酰化对lncRNA-BMP4的转录调控作用.[结果]试验成功扩增lncRNA-BMP4启动子片段1 288 bp,与pEGFP-N1载体连接后转染鸡成纤维细胞系(DF-1)具有荧光表达,说明lncRNA-BMP4启动子有启动活性.染色体5'-末端缺失和双荧光素酶系统检测发现,核心启动子区域为-832～-651 bp,Jaspar数据库分析筛选到核心区域的转录因子有SOX17、CREB1及STAT1.双荧光素酶系统检测发现,STAT1可促进lncRNA-BMP4核心启动区域的活性;DNA甲基化抑制剂5'-Azacd对lncRNA-BMP4的转录活性未有任何影响,而组蛋白乙酰化抑制剂TSA可极显著提高其转录活性(P＜0.01).[结论]提示lncRNA-BMP4的转录活性受STAT1和组蛋白乙酰化的正调控,而DNA甲基化不影响其转录.研究结果为详细解析lncRNA-BMP4的功能和分子机制提供了理论依据.

鸡;lncRNA;启动子;STAT1;表观遗传修饰

高晓敏;周舒简;陈晨;金晶;胡菜;张晨;左其生;张亚妮;陈国宏;李碧春

扬州大学动物科学与技术学院,中国教育部国际农业与农产品安全研究联合实验室,扬州225009;江苏科技大学生物技术学院,镇江212003

中国畜牧兽医

[1]高晓敏;周舒简;陈晨;金晶;胡菜;张晨;左其生;张亚妮;陈国宏;李碧春-.STAT1和组蛋白乙酰化修饰调控鸡lncRNA-BMP4转录研究)[J].中国畜牧兽医,2022(09):3321-3332

EFGP,Jaspar,Azacd

STAT1,组蛋白乙酰化,乙酰化修饰,lncRNA,BMP4,长链非编码,long,chain,noncoding,骨形态发生蛋白,bone,morphogenetic,protein,特异表达,启动活性,双荧光素酶,酶系统,系统检测,检测筛选,子核,核心区域,预测分析,点突变,甲基化,转录调控,bp,pEGFP,N1,转染,鸡成纤维细胞系,DF,光表,核心启动子,启动子区域,数据库分析,SOX17,CREB1,转录活性,TSA,正调控,表观遗传修饰

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