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多房棘球绦虫RNA结合蛋白28的鉴定
文献摘要：
目的 通过扩增多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis)RNA结合蛋白28(RBP28)基因并构建重组表达质粒,诱导表达并纯化重组RBP28蛋白,探索多房棘球绦虫RBP28的分子特征.方法 根据WormBase数据库RBP28基因序列设计特异性引物;RT-PCR扩增RBP28基因并构建重组表达质粒,诱导表达并纯化重组RBP28蛋白,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体;用Western blot检测多克隆抗体特异性,并通过免疫荧光观察RBP28在多房棘球蚴及其细胞中的分布;利用免疫共沉淀技术,获得与RBP28互作的蛋白沉淀产物后,对二者进行蛋白银染和质谱鉴定.结果 RBP28编码基因大小约为1 245 bp;重组RBP28相对分子质量约为Mr 50 000;Western blot结果表明,多克隆抗体能够特异性识别重组蛋白RBP28及多房棘球蚴全蛋白中的天然RBP28蛋白,但与猪带绦虫、泡状带绦虫和细粒棘球绦虫无明显的抗原交叉反应;免疫荧光定位表明,RBP28主要分布在多房棘球蚴的生发层,在多房棘球蚴细胞则主要分布于细胞质中;对银染和质谱鉴定结果比较分析,获得了 7种可能与RBP28相互作用的蛋白质.结论 本研究确定了 RBP28蛋白编码基因的大小、分子量及其多克隆抗体的特异性.通过免疫荧光定位,发现RBP28主要分布在多房棘球蚴的生发层,并利用质谱鉴定获得了 7种与RBP28有互相作用的蛋白质,为研究多房棘球绦虫病的致病机制奠定了基础.
文献关键词：
多房棘球蚴;RNA结合蛋白28;免疫荧光定位;免疫共沉淀;质谱
中图分类号：
作者姓名：
寇永杰;李瑞;郑亚东;夏天奇;时恒枝;王璞;杨兴;孙晓林
作者机构：
甘肃农业大学动物医学院,兰州 730030;浙江省绿色生态健康畜牧业应用技术重点实验室,浙江省动物卫生检验与互联网技术工程实验室,浙江省兽药与健康管理国际科技合作基地,浙江农林大学动物科技学院,动物医学院,中澳动物健康大数据分析联合实验室,杭州 311300;大理学院基础医学院,大理 671000
文献出处：
引用格式：
[1]寇永杰;李瑞;郑亚东;夏天奇;时恒枝;王璞;杨兴;孙晓林-.多房棘球绦虫RNA结合蛋白28的鉴定)[J].中国人兽共患病学报,2022(06):490-495
A类：
RBP28,WormBase
B类：
多房棘球绦虫,结合蛋白,Echinococcus,multilocularis,重组表达,质粒,诱导表达,分子特征,基因序列,序列设计,特异性引物,新西兰大白兔,多克隆抗体,blot,抗体特异性,多房棘球蚴,免疫共沉淀,蛋白沉淀,白银,银染,质谱鉴定,编码基因,bp,相对分子质量,Mr,特异性识别,重组蛋白,全蛋,带绦虫,泡状,细粒棘球绦虫,原交,交叉反应,免疫荧光定位,细胞质,结果比较,蛋白编码,分子量,绦虫病,致病机制
AB值：
0.208619
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