[目的]旨在进一步研究草鱼(Ctenopharygodon idella)莫洛尼鼠白血病病毒前病毒整合基因1(Proviral integration of moloney murineleukemia virus,Pim-1)的功能.[方法]采用RACE法克隆草鱼Pim-1(CiPim-1)的全长cDNA序列,并对其全长序列进行生物信息学分析.采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测CiPim-1在健康草鱼肝脏、肾脏、头肾、脾脏、肠、心脏、鳃、皮肤、肌肉及血液中的相对表达量,同时将CiPim-1基因(246～318 aa)片段克隆到原核表达质粒pGEX-4T-1中,转入E.coli Rosetta菌株,经IPTG诱导后成功表达重组蛋白pGEX-4T-1-Pim1,随后采用纯化后的融合蛋白免疫新西兰大白兔获得抗血清,并通过ELISA测定抗血清效价,最后采用免疫印迹(Western Blotting)分析抗体的特异性.[结果]CiPim-1基因序列全长1082 bp,编码318个氨基酸,分子量为36.14 ku,具有1个蛋白激酶结构域(Protein kinase domain,35～287 aa).同源性及系统进化结果显示,CiPim-1氨基酸序列与其它鱼类及哺乳类Pim-1均具有较高的相似性和一致性,与斑马鱼(Danio rerio)Pim-1亲缘关系最近.qRT-PCR结果表明,CiPim-1在草鱼血液和组织中均广泛表达,在心脏组织中的相对表达量最丰富,显著高于相对表达量最低的肝脏组织(P>0.05).ELISA与Western blotting结果表明,经抗原亲和纯化后获得的CiPim-1多克隆抗体,效价高,能够特异性识别CiPim-1重组蛋白.[结论]研究克隆了CiPim-1基因,发现该基因在草鱼组织中广泛表达,且成功制备了CiPim-1多克隆抗体,为深入研究CiPim-1在草鱼细胞周期调控、增殖、分化及凋亡等生理过程中的作用奠定了基础.

草鱼;Pim-1;克隆;组织表达;原核表达;多克隆抗体

江西农业大学 动物科学技术学院,江西 南昌 330045

[1]王辉;刘林;阮记明;梁惜梅;隗黎丽-.草鱼Pim-1基因克隆、组织表达及多克隆抗体的制备)[J].江西农业大学学报,2022(03):670-678

Ctenopharygodon,Proviral,murineleukemia,CiPim

草鱼,基因克隆,组织表达,多克隆抗体,idella,洛尼,白血病,病毒整合,integration,moloney,virus,RACE,全长,cDNA,生物信息学分析,qRT,鱼肝,头肾,脾脏,相对表达量,aa,原核表达,质粒,pGEX,4T,转入,coli,Rosetta,IPTG,重组蛋白,Pim1,融合蛋白,新西兰大白兔,抗血清,效价,免疫印迹,Blotting,基因序列,bp,分子量,ku,蛋白激酶,酶结构,结构域,Protein,kinase,domain,同源性,系统进化,氨基酸序列,鱼类,哺乳类,斑马鱼,Danio,rerio,亲缘关系,心脏组织,肝脏组织,blotting,亲和纯化,价高,特异性识别,细胞周期,周期调控,生理过程

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