[目的]扩增努比亚山羊LIM结构域基因1(LIM domain gene 1,LMCD1)并进行生物信息学分析,构建真核表达载体并检测LMCD1基因的表达情况,为研究努比亚山羊LMCD1基因功能及探究LMCD1 基因在山羊骨骼肌肉发育中的作用提供依据.[方法]从努比亚山羊背最长肌组织中提取总RNA,应用RT-PCR方法扩增LMCD1基因CDS区序列,并进行生物信息学分析;将LMCD1基因以同源重组的方式连接pEGFP-N1载体,经酶切、测序鉴定后重组阳性质粒命名为pEGFP-N1-LMCD1;将pEGFP-N1-LMCD1重组质粒转染至山羊骨骼肌卫星细胞,通过实时荧光定量PCR检测努比亚山羊LMCD1基因的表达情况.[结果]努比亚山羊LMCD1基因CDS区序列全长1 092 bp,编码363个氨基酸.LMCD1蛋白分子式为C1775H2818N508O533S29,分子质量为40.73 ku.努比亚山羊LMCD1基因CDS区序列与山羊相似性最高(99.8％),与斑马鱼相似性最低(55.4％),与其他物种的相似性在87.0％～98.8％之间.LMCD1蛋白无信号肽,不存在跨膜结构域,为亲水性蛋白.通过构建努比亚山羊pEGFP-N1-LMCD1真核表达载体并转染至骨骼肌卫星细胞,过表达LMCD1基因,产生绿色荧光信号.[结论]试验成功扩增LMCD1基因 CDS区序列,构建了 pEGFP-N1-LMCD1真核表达载体,并分析了生物学功能,为后续开展LMCD1基因在山羊骨骼肌肉发育中的机制研究提供了理论基础.

努比亚山羊;LMCD1基因;生物信息学分析;真核表达载体;表达

邹剑伟;邹菊红;申玉建;韦一;张叁保;连子童;徐建建;宋颖;黄艳娜;韦英明;蒋钦杨;郑自华

广西大学动物科学技术学院,南宁530004;广西大学农牧产业发展研究院,南宁530004

中国畜牧兽医

[1]邹剑伟;邹菊红;申玉建;韦一;张叁保;连子童;徐建建;宋颖;黄艳娜;韦英明;蒋钦杨;郑自华-.努比亚山羊LMCD1基因生物信息学分析、真核表达载体的构建及表达)[J].中国畜牧兽医,2022(06):2033-2042

LMCD1,山羊骨骼肌卫星细胞,C1775H2818N508O533S29

努比亚山羊,生物信息学分析,真核表达载体,LIM,domain,gene,基因功能,肌肉发育,背最长肌,肌组织,CDS,同源重组,pEGFP,N1,重组质粒,质粒转染,全长,bp,分子式,分子质量,ku,斑马鱼,信号肽,跨膜结构域,亲水性,过表达,荧光信号,生物学功能

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