典型文献
斑马鱼notch3基因真核表达载体的构建及其表达分析
文献摘要：
为了进一步研究notch3基因在斑马鱼中的功能,构建了斑马鱼notch3真核表达载体并在真核细胞中成功表达.其中斑马鱼notch3基因编码序列(coding sequence,CDS)从NCBI的在线数据库中获得,根据序列克隆其胞内段(notch intracellular domain,NICD),接着利用同源重组技术构建pCMV-N3ICD表达载体.再通过双酶切和测序筛选阳性重组载体,借由脂质体法转染至HEK293T细胞中,最后经细胞免疫荧光技术和蛋白质印迹法验证N3ICD的表达.结果显示,重组质粒经酶切电泳片段及测序比对均与预期结果一致.在蛋白质印迹实验中N3ICD蛋白可正常表达,且大小与预测结果一致.细胞免疫荧光显示重组质粒可以在HEK293T细胞的细胞核中表达.同时,构建的N3ICD真核表达载体能够明显增强NF-κB(nuclear factor-кB)家族中rela和nfκb1启动子的活性.成功构建了pCMV-N3ICD真核表达载体.
文献关键词：
斑马鱼;notch3;N3ICD;免疫荧光;真核表达载体;NF-κB
中图分类号：
作者姓名：
吴坤坤;徐行;季策;任建峰;李伟明;张庆华
作者机构：
上海海洋大学 水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室,上海 201306;上海海洋大学 国家水生动物病原库,上海 201306;密歇根州立大学渔业与野生生物系,东兰辛 48824,美国
文献出处：
引用格式：
[1]吴坤坤;徐行;季策;任建峰;李伟明;张庆华-.斑马鱼notch3基因真核表达载体的构建及其表达分析)[J].生物技术通报,2022(01):179-186
A类：
notch3,N3ICD
B类：
斑马鱼,真核表达载体,表达分析,真核细胞,基因编码,编码序列,coding,sequence,CDS,NCBI,列克,intracellular,domain,NICD,同源重组,重组技术,技术构建,pCMV,双酶,重组载体,脂质体法,转染,HEK293T,细胞免疫,免疫荧光技术,蛋白质印迹法,重组质粒,粒经,电泳,预期结果,细胞核,明显增强,nuclear,rela,nf,b1,启动子
AB值：
0.313411
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