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马泰勒虫AMA1基因的真核表达与鉴定
文献摘要：
以GenBank中马泰勒虫(Theileria equi,T.equi)美国WA株基因组序列(XM_004833042.1)为 目标,选取目前公开的所有顶复门原虫泰勒虫属顶膜抗原1(apical membrane antigen 1,AM A1)基因进行本地BLAST比对.针对目的基因片段设计特异性引物后,以T.equi新疆分离株为模板对AMA1目的基因片段进行扩增克隆,并对T.equi AMA1蛋白进行真核表达以及多克隆抗体制备,最后通过间接免疫荧光和Western blot鉴定真核重组蛋白.结果 显示,成功扩增出T.equi新疆株AMA1基因,与T.equi美国WA株AMA1基因相比,两者进化关系最为接近,核苷酸和氨基酸同源性分别为76.34％和78.64％.成功在HEK293T细胞中表达AMA1真核重组蛋白,约为55 kDa,将AMA1原核重组蛋白免疫小鼠后,所产生的多克隆抗体效价为1 ∶819 200.Western blot结果显示,免疫小鼠产生的多克隆抗体可以识别AMA1真核重组蛋白,表明重组蛋白具有较好的抗原性.本试验完成了 T.equi AMA1真核重组蛋白的鉴定和多克隆抗体的制备,为后续开展T.equi保护性抗原研究提供了候选靶点,为进一步探究T.equi入侵宿主细胞机制奠定理论基础.
文献关键词：
马泰勒虫;AMA1基因;真核表达
中图分类号：
作者姓名：
范士龙;芦星;王水怡;刘丹丹;王金明;李思媛;刘明明;刘雨桐;巴音查汗;张伟
作者机构：
新疆农业大学动物医学学院,新疆乌鲁木齐830052
文献出处：
引用格式：
[1]范士龙;芦星;王水怡;刘丹丹;王金明;李思媛;刘明明;刘雨桐;巴音查汗;张伟-.马泰勒虫AMA1基因的真核表达与鉴定)[J].中国兽医学报,2022(12):2413-2419
A类：
AMA1
B类：
马泰勒虫,真核表达,GenBank,中马,Theileria,equi,WA,基因组序列,XM,原虫,apical,membrane,antigen,BLAST,目的基因,特异性引物,新疆分离株,多克隆抗体制备,间接免疫荧光,blot,重组蛋白,进化关系,同源性,HEK293T,kDa,原核,抗体效价,抗原性,保护性抗原,原研,宿主,主细胞
AB值：
0.245714
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