典型文献
猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因重组DNA疫苗的构建及其免疫效果评价
文献摘要：
[目的]利用DNA改组技术(DNA shuffling)对不同谱系的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5基因进行体外重组,构建具有良好交叉保护作用的DNA疫苗,为研制新型PRRSV疫苗提供参考.[方法]利用DNA改组技术对PRRSV谱系1、3、5.1、8.7毒株的ORF5基因进行体外突变重组,筛选去除信号肽的重组突变体.将重组突变体与真核表达载体pCAGGS-HA连接,构建重组表达质粒并进行酶切和测序鉴定,经脂质体转染MARC-145细胞,利用间接免疫荧光试验(IFA)和Western blotting试验检测目的蛋白的表达情况.将重组质粒pCA-ΔORF5-8和pCA-ΔORF5-46(ORF5基因重组的DNA疫苗)免疫小鼠,试验同时设pCAGGS-HA空载体组、PBS空白对照组、弱毒疫苗组(经典弱毒疫苗Ingelvac PRRS MLV,MLV组)和pCA-ORF5-MLV组(ORF5基因来自Ingelvac PRRS MLV),评估其免疫效果.[结果]筛选到2个去除信号肽的重组突变体(ΔORF5-8和ΔORF5-46).成功构建重组表达质粒pCA-ΔORF5-8和pCA-ΔORF5-46,其可在MARC-145细胞中表达GP5蛋白.与pCAGGS-HA空载体组和PBS空白对照组相比,pCA-ΔORF5-8和pCA-ΔORF5-46组免疫小鼠血清白介素4(IL-4)和干扰素γ(INF-γ)含量均极显著提高(P＜0.01),脾淋巴细胞增殖能力均极显著增强(P＜0.01),均能产生针对GP5蛋白的抗体,血清中和试验表明,免疫组小鼠血清能对异源毒株产生交叉中和抗体(抗体平均滴度为10～16).[结论]重组DNA疫苗pCA-ΔORF5-8和pCA-ΔORF5-46均能有效刺激并诱导机体产生细胞及体液免疫应答,具有良好的免疫原性.
文献关键词：
猪繁殖与呼吸综合征病毒;ORF5基因;DNA改组技术;重组DNA疫苗;交叉保护
中图分类号：
作者姓名：
魏春华;黄夏玲;杨圆;何乐;林志锋;徐叶;黄文琳;柳开隆;戴爱玲;杨小燕;刘建奎
作者机构：
龙岩学院生命科学学院,福建龙岩364000;龙岩学院福建省家畜传染病防治与生物技术重点实验室,福建龙岩364000;龙岩学院预防兽医学与生物技术福建省高校重点实验室,福建龙岩364000;福建农林大学动物科技学院,福建福州350002
文献出处：
引用格式：
[1]魏春华;黄夏玲;杨圆;何乐;林志锋;徐叶;黄文琳;柳开隆;戴爱玲;杨小燕;刘建奎-.猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因重组DNA疫苗的构建及其免疫效果评价)[J].西北农林科技大学学报（自然科学版）,2022(07):17-25
A类：
pCA,Ingelvac
B类：
猪繁殖与呼吸综合征病毒,ORF5,基因重组,免疫效果评价,改组,shuffling,PRRSV,交叉保护,毒株,外突,变重,选去,信号肽,突变体,真核表达载体,pCAGGS,HA,重组表达,脂质体转染,MARC,间接免疫荧光试验,IFA,blotting,试验检测,检测目的,目的蛋白,重组质粒,空载,PBS,空白对照,弱毒疫苗,MLV,GP5,小鼠血清,清白,白介素,干扰素,INF,脾淋巴细胞,淋巴细胞增殖,细胞增殖能力,血清中和试验,异源,株产,交叉中和抗体,滴度,体液免疫,免疫应答,免疫原性
AB值：
0.253828
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