典型文献
日本鳗鲡肠道N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的分离纯化及酶学性质
文献摘要：
为了探讨日本鳗鲡(Anguillajaponica)N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(EC3.2.1.52,NAGase)的分离纯化及其酶学性质,通过硫酸铵沉淀分级分离、Sephadex G-100分子筛凝胶柱层析和DEAE-32离子交换柱层析纯化NAGase,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和SDS-PAGE鉴定酶的纯度、测定酶蛋白亚基分子质量;以对-硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖为底物,研究NAGase催化反应的动力学参数,探讨其酶学性质.结果表明:日本鳗鲡肠道NAGase纯酶制剂比活力为2517.40 U/mg,酶蛋白亚基分子质量为69.98 kD,酶的最适pH、最适温度、米氏常数Km和最大反应速度Vmax分别为6.0、60℃、0.336 mmol/L和7.634 μmol/(L·min);酶在pH 4.8-7.2较稳定,在温度60℃以下具有较好的热稳定性,在65℃以上酶迅速失活.Mg2+、Ca2+、Mn2+、Cu2+和Fe3+对NAGase表现出不同程度的激活作用,Na+、Li+和Ba2+对酶活力几乎没有影响,Zn2+、Fe2+、Pb2+和Hg2+对酶活力有不同程度的抑制作用,Hg2+对酶活力抑制作用最强,1.0 μmol/L Hg2+可使酶活力丧失83.69％.化学修饰法研究表明,精氨酸胍基不是日本鳗鲡NAGase的必需基团,而赖氨酸ε-氨基、半胱氨酸巯基、组氨酸咪唑基、丝氨酸羟基和色氨酸吲哚基是酶的必需基团,二硫键是NAGase活性所必需的.综上所述,实验采用的日本鳗鲡肠道NAGase分离纯化方案有效可行,酶活力易受环境中酸碱度、温度和金属离子的影响,且与其他不同动物来源的NAGase具有相似的必需基团.
文献关键词：
分离纯化;酶学性质;必需基团;N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶;日本鳗鲡
中图分类号：
作者姓名：
林建城;胡建辉;吴钦端
作者机构：
莆田学院环境与生物工程学院,福建省新型污染物生态毒理效应与控制重点实验室,生态环境及其信息图谱福建省高等学校重点实验室(莆田学院),莆田351100
文献出处：
引用格式：
[1]林建城;胡建辉;吴钦端-.日本鳗鲡肠道N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的分离纯化及酶学性质)[J].水生生物学报,2022(09):1301-1309
A类：
Anguillajaponica,必需基团
B类：
日本鳗鲡,氨基葡萄糖,葡萄糖苷酶,分离纯化,酶学性质,EC3,NAGase,过硫酸铵,分级分离,Sephadex,分子筛,柱层析,DEAE,离子交换,层析纯化,聚丙烯酰胺凝胶电泳,PAGE,SDS,蛋白亚基,分子质量,硝基苯,底物,催化反应,动力学参数,酶制剂,比活力,kD,Km,最大反应速度,Vmax,热稳定性,失活,Mg2+,Ca2+,Mn2+,Cu2+,Fe3+,Na+,Li+,Ba2+,酶活力,Zn2+,Fe2+,Pb2+,Hg2+,化学修饰,精氨酸,胍基,赖氨酸,巯基,组氨酸,咪唑,丝氨酸,色氨酸,吲哚,二硫键,综上所述,酸碱度,金属离子
AB值：
0.30769
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