典型文献
家蚕丝腺中Abd-A 3种剪接体的克隆、序列分析及原核表达
文献摘要：
为探究转录因子Abdominal-A(Abd-A)在家蚕丝腺中的剪接形式及其序列特征,明确与其他昆虫Abd-A的亲缘关系,以家蚕丝腺组织cDNA为模板,对转录因子Abd-A进行PCR扩增,利用生物信息学方法,对Abd-A的序列特征以及不同昆虫间Abd-A的进化关系进行分析;并通过原核表达系统对Abd-A进行体外重组表达,利用SDS-PAGE和Western blot检测其蛋白质表达水平.结果显示,从家蚕丝腺中克隆到Abd-A的3种剪接体,其编码区长度分别为1 059、1 044、1 032 bp,分别命名为BmAbd-A L(A59T)、BmAbd-A S、BmAbd-A 3.不同昆虫Abd-A的多序列比对结果表明,它们的氨基酸序列差异较大,但都具有DNA结合结构域Homeobox domain和转录激活结构域Abd-A domain,其中Homeobox domain序列完全保守,而Abd-A domain的羧基端序列存在较大差异.三维结构预测结果表明,Abd-A的3种剪接体编码蛋白质中均有4个α螺旋结构和无规则卷曲结构,其中无规则卷曲结构差异较大.系统发育分析结果表明,35种不同昆虫的Abd-A编码的氨基酸序列主要分为4个目,分别为双翅目、鳞翅目、鞘翅目、膜翅目,家蚕的Abd-A氨基酸序列与大蜡螟(鳞翅目:螟蛾科)在进化关系上更近,其次为玉米螟.SDS-PAGE 及 Western blot 分析表明,BmAbd-A L(A59T)、BmAbd-A S、BmAbd-A 3 的融合蛋白主要以可溶形式在大肠杆菌中表达,其理论分子质量分别为52.99、52.35、51.91 ku,与预期一致.综上,从家蚕丝腺中成功克隆到Abd-A的3种剪接体,它们的序列及三维结构间具有差异性,其分子进化过程与物种系统进化一致,并利用原核表达系统获得可溶性的Abd-A重组蛋白.
文献关键词：
家蚕;丝腺;Abd-A;剪接体;原核表达
中图分类号：
作者姓名：
路庆君;罗竹星;刘华伟;魏梦;王圆;张照锋;李游山
作者机构：
陕西理工大学生物科学与工程学院,陕西汉中723001;陕西理工大学秦巴生物资源与生态环境省部共建国家重点实验室(培育),陕西汉中723001;西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室,重庆400716
文献出处：
引用格式：
[1]路庆君;罗竹星;刘华伟;魏梦;王圆;张照锋;李游山-.家蚕丝腺中Abd-A 3种剪接体的克隆、序列分析及原核表达)[J].河南农业科学,2022(04):138-150
A类：
BmAbd,A59T
B类：
家蚕,蚕丝,丝腺,剪接体,序列分析,原核表达,Abdominal,序列特征,昆虫,亲缘关系,cDNA,利用生物,生物信息学方法,进化关系,表达系统,重组表达,SDS,PAGE,blot,蛋白质表达水平,编码区,区长,bp,多序列比对,氨基酸序列,序列差异,结合结构,结构域,Homeobox,domain,转录激活,活结,羧基端,三维结构,结构预测,编码蛋白,螺旋结构,无规则,卷曲结构,结构差异,系统发育分析,双翅目,鳞翅目,鞘翅目,膜翅目,大蜡螟,螟蛾科,系上,玉米螟,融合蛋白,大肠杆菌,分子质量,ku,分子进化,种系,系统进化,重组蛋白
AB值：
0.27262
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