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应用杆状病毒表达系统有效表达PEDV纤突蛋白
文献摘要：
为了解决猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)变异毒株纤突蛋白(S蛋白)分子质量大、难以表达的问题,研究采用Signal 4.0软件预测S蛋白信号肽,构建表达替换信号肽S蛋白的重组质粒,鉴定正确后重组质粒转化DH10Bac感受态细胞并进行蓝白斑筛选,挑取白斑进行菌落PCR检测,检测无误后提取Bacmid DNA转染Sf9细胞,制备重组杆状病毒.采用杆状病毒表达系统表达目的蛋白,采用免疫印迹法(West?ern blot)和串联式飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOF)技术鉴定表达蛋白,采用SDS-PAGE半定量方法测定蛋白含量;以Balb/c小鼠为材料进行免疫试验,应用中和试验、ELISPOT试验测定小鼠抗体滴度及细胞因子水平.结果表明,S蛋白氨基端20个氨基酸为蛋白信号肽,重组质粒经双酶切鉴定构建成功,经菌体PCR检测验证表达骨架构建完成,转染Sf9细胞后获得重组病毒rB-PEDV-S;重组病毒表达蛋白经Western-blot和MALDI-TOF-TOF鉴定为目的蛋白,蛋白质量浓度可达0.0086μg/μL;替换原有信号肽可有效提高S蛋白产量,以0.86μg/只剂量免疫小鼠后,可刺激小鼠产生IL-4,但血清抗体水平与PBS组无明显差异.替换信号肽有助于S蛋白表达,利用表达蛋白免疫小鼠可有效刺激IL-4产生.
文献关键词：
猪流行性腹泻病毒(PEDV);杆状病毒;免疫印迹法;串联式飞行时间质谱;蛋白表达;疫苗
中图分类号：
作者姓名：
郝建伟;薛春宜;曹永长
作者机构：
晋中学院 生物科学与技术系,山西 晋中030600;中山大学 生命科学学院/有害生物控制与资源利用国家重点实验室,广东 广州 510006
文献出处：
引用格式：
[1]郝建伟;薛春宜;曹永长-.应用杆状病毒表达系统有效表达PEDV纤突蛋白)[J].山西农业科学,2022(05):714-719
A类：
串联式飞行时间质谱
B类：
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AB值：
0.309004
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