典型文献
降解AFB1的枯草芽孢杆菌S1分离与鉴定
文献摘要：
[目的]筛选出能够高效降解黄曲霉毒素(aflatoxin,AF)的菌株,并对其降解活性及残留毒性进行检测,以期为黄曲霉毒素B1(alflatoxin B1,AFB1)污染防治提供参考.[方法]采集耗牛、绵羊等草食性动物粪便和养殖场霉变饲料,以AFB1的结构类似物香豆素为唯一碳源筛选降解AFB1效率最高的菌株,并对其进行形态学、生理生化和16SrDNA鉴定.取AFB1与适量筛选菌株的发酵液混合,使AFB1的浓度为1 μg/mL,37℃、150 r/min培养,测定培养不同时间AFB1 降解率;应用差速离心法分别制取上清液、菌悬液和菌体,将菌体超声裂解后制得胞内液,测定不同组分对AFB1 的降解率;对上清液分别进行蛋白酶K、蛋白酶K+SDS和热处理,检测处理后上清液AFB1 降解率;分别用不同浓度的饱和硫酸铵沉淀处理上清液,检测AFB1降解率;应用7 ku透析袋对上清液进行浓缩,检测AFB1 降解率,从而判断菌株活性成分的性质和分布.将鸡肝细胞分为AFB1 组、AFB1-菌株组、菌株组和空白对照组,用实时荧光定量PCR检测各组鸡肝细胞中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosisi factor alpha,TNF-α)和Bcl-2-associated X蛋白(Bax)基因的相对表达量.[结果]经初筛和复筛,从编号为S1的绵羊粪便样品中分离出1株菌株,其降解AFB1 的活性最高,降解率可达60.36％.菌株S1在LB固体培养基上培养12 h,可观察到淡黄色不透明菌落,表面光滑,有隆起,镜检革兰氏染色呈阳性,杆状.16S rDNA基因进行PCR扩增并进一步测序分析,其序列与LC55966.1的同源性为100％.综合16 S rDNA序列分析和生理生化结果鉴定该菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).该菌发酵液与AFB1(1 μg/mL)反应4、12、24、48和72 h,降解率分别达到10.98％、25.36％、46.24％和52.65％和80.84％.上清液AFB1降解率显著高于菌悬液和胞内液(P＜0.05).热处理后,上清液的AFB1降解活性降低,而经蛋白酶K和SDS处理后降解活性基本丧失.用不同浓度饱和硫酸铵处理的上清液AFB1 降解率差异不显著(P＞0.05),而经透析浓缩后的上清液AFB1 降解率显著高于硫酸铵处理的上清液沉淀蛋白(P＜0.05).在鸡胚胎肝脏原代细胞上,与AFB1组相比,AFB1经枯草芽孢杆菌S1降解后诱导IL-6、TNF-a以及Bax的表达量均显著降低(P＜0.05).[结论]筛选到1株枯草芽孢杆菌S1,其具有较高的降解AFB1的活性,其降解活性主要来自于培养液上清中的蛋白质;AFB1经降解后其毒素显著降低.
文献关键词：
黄曲霉毒素B1;枯草芽孢杆菌;毒素降解
中图分类号：
作者姓名：
孙向丽;刘宇翱;时子瑶;温长印;田亚东;康相涛;王彦彬
作者机构：
河南农业大学动物科技学院,郑州450046;河南农业大学动物医学院,郑州450046;河南金尔康生物科技有限公司,新乡453000
文献出处：
引用格式：
[1]孙向丽;刘宇翱;时子瑶;温长印;田亚东;康相涛;王彦彬-.降解AFB1的枯草芽孢杆菌S1分离与鉴定)[J].中国畜牧兽医,2022(12):4654-4664
A类：
alflatoxin,K+SDS,necrosisi,LC55966
B类：
AFB1,枯草芽孢杆菌,S1,分离与鉴定,黄曲霉毒素,aflatoxin,污染防治,耗牛,绵羊,草食性,动物粪便,养殖场,霉变饲料,结构类似物,香豆素,唯一碳源,生理生化,16SrDNA,发酵液,降解率,差速离心,离心法,制取,上清液,菌悬液,菌体,超声裂解,不同组分,热处理,饱和硫酸铵,ku,透析袋,活性成分,鸡肝,肝细胞,空白对照,interleukin,tumor,alpha,Bcl,associated,Bax,相对表达量,初筛,复筛,编号,羊粪,粪便样品,LB,固体培养基,淡黄色,菌落,表面光,隆起,革兰氏染色,杆状,步测,测序分析,同源性,序列分析,Bacillus,subtilis,鸡胚胎,原代细胞,培养液,毒素降解
AB值：
0.258654
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