典型文献
1种导致凝血因子Ⅺ蛋白分泌障碍的基因突变及其机制研究
文献摘要：
目的:对1个遗传性凝血因子Ⅺ（FⅪ）缺陷症家系新发现的基因突变进行分子致病机制研究。方法:先证者因“肝内胆管结石”于2021年9月就诊于温州医科大学附属第一医院，患者平素无自发性出血症状。收集该先证者及其家系成员（共3代10人）的临床资料和血液样本，采用一期凝固法检测血浆活化部分凝血活酶时间（APTT）和FⅪ活性（FⅪ：C），酶联免疫吸附实验（ELISA）检测FⅪ抗原（FⅪ：Ag）；采用DNA直接测序法对F11基因进行分析。运用生物信息学软件辅助分析突变对蛋白结构和功能的影响。构建野生型和突变型FⅪ蛋白表达载体，瞬时转染HEK293T细胞；提取阳性转染细胞内的总RNA，将RNA逆转录为cDNA，通过实时荧光定量PCR法（qRT-PCR）检测转染细胞内F11基因的mRNA表达水平；采用ELISA法和蛋白免疫印迹实验分别检测转染细胞裂解液及培养上清液中FⅪ：Ag含量和FⅪ蛋白表达量。结果:先证者APTT为107.9 s（参考范围29.0~43.0 s），FⅪ：C和FⅪ：Ag明显下降，分别为2%（参考范围84%~122%）和5%（参考范围76%~127%）。基因分析显示先证者F11基因第6号外显子存在c.536C>T（p.Thr161Met）杂合错义突变及第13号外显子存在c.1556G>A（p.Trp501Ter）杂合无义突变。生物信息学分析显示，在5种不同物种组成的矩阵中FⅪ蛋白161位点氨基酸均为苏氨酸（Thr），表明Thr161位点在不同物种同源基因间高度保守，p.Thr161Met杂合突变会影响FⅪ蛋白局部分子间结构稳定性。p.Thr161Met突变对F11基因转录水平没有影响，但突变导致FⅪ：Ag含量和FⅪ蛋白表达量在细胞培养上清液中明显低于野生型表达载体，在细胞裂解液中高于野生型表达载体，即p.Thr161Met突变导致FⅪ蛋白分泌障碍。结论:p.Thr161Met杂合错义突变和p.Trp501Ter杂合无义突变与该家系FⅪ水平降低有关。p.Thr161Met杂合错义突变不影响FⅪ蛋白的合成，可能导致分泌障碍。
文献关键词：
血液凝固因子;因子Ⅺ缺乏;基因突变;生物信息学;体外表达
中图分类号：
作者姓名：
蒋淑婷;陈元;刘媚娜;曾蔓霖;贾恺琦;杨丽红;金艳慧;王明山
作者机构：
温州医科大学附属第一医院医学检验中心，温州325015
文献出处：
引用格式：
[1]蒋淑婷;陈元;刘媚娜;曾蔓霖;贾恺琦;杨丽红;金艳慧;王明山-.1种导致凝血因子Ⅺ蛋白分泌障碍的基因突变及其机制研究)[J].中华检验医学杂志,2022(05):488-493
A类：
536C,Thr161Met,1556G,Trp501Ter,Thr161
B类：
凝血因子,基因突变,遗传性,缺陷症,家系,新发现,致病机制,先证者,肝内胆管结石,温州,平素,自发性出血,出血症状,其家,血液样本,活化部分凝血活酶时间,APTT,酶联免疫吸附实验,Ag,直接测序,F11,生物信息学软件,辅助分析,蛋白结构,结构和功能,野生型,突变型,表达载体,转染,HEK293T,逆转录,cDNA,qRT,蛋白免疫印迹,免疫印迹实验,养上,上清液,参考范围,基因分析,外显子,错义突变,及第,无义突变,生物信息学分析,物种组成,苏氨酸,同源基因,杂合突变,结构稳定性,基因转录水平,细胞培养,平降,血液凝固因子,体外表达
AB值：
0.261556
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