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尿路致病性大肠埃希菌通过TcpC抑制巨噬细胞吞噬的信号通路研究
文献摘要：
目的:探究尿路致病性大肠埃希菌TcpC N端泛素连接酶片段抑制巨噬细胞吞噬的信号通路。方法:生物信息学软件分析TcpC N端泛素连接酶片段氨基酸序列结构与功能，并预测其功能位点。PCR扩增 tcpc N端不同长度片段 tcpc-330、 tcpc-450和 tcpc-510基因并构建其原核表达系统。Ni-NTA亲和层析法纯化目的重组蛋白rTcpC-N110、rTcpC-N150和rTcpC-N170；Detoxi-Gel层析柱去除目的重组蛋白中可能含有的LPS。Western blot和实时荧光定量RT-PCR检测rTcpC-N110、rTcpC-N150、rTcpC-N170和rTcpC-TIR分别孵育巨噬细胞后胞内MyD88蛋白水平和mRNA水平。Western blot检测上述蛋白质孵育巨噬细胞后NF-κB信号通路活化情况。ELISA检测上述蛋白质孵育巨噬细胞后促炎因子水平。 结果:TcpC N端片段氨基酸序列中第12位半胱氨酸、第104位色氨酸和第106位色氨酸是其泛素连接酶活性的功能位点。所构建的原核表达系统在IPTG诱导下能够有效表达rTcpC-N110、rTcpC-N150和rTcpC-N170，Ni-NTA亲和层析法提纯后均仅见单一蛋白质条带。Detoxi-gel亲和层析柱处理后rTcpC-N110、rTcpC-N150和rTcpC-N170中LPS为阴性。TcpC泛素连接酶片段能够抑制MyD88蛋白水平但不影响其mRNA水平。TcpC泛素连接酶片段显著抑制LPS诱导的NF-κB信号通路p50和p65的磷酸化。TcpC泛素连接酶片段显著抑制LPS诱导的巨噬细胞促炎因子的产生。结论:rTcpC-N110、rTcpC-N150和rTcpC-N170具有抑制MyD88蛋白水平和NF-κB信号通路活化功能，与抑制巨噬细胞固有免疫活性密切相关。
文献关键词：
尿路致病性大肠埃希菌;TcpC;泛素连接酶;抑制;固有免疫
中图分类号：
作者姓名：
马欣鹏;罗薇薇;李雯婷;欧茜;裘佳灵;岑诺;方佳琪
作者机构：
浙大城市学院医学院，杭州 310015
文献出处：
引用格式：
[1]马欣鹏;罗薇薇;李雯婷;欧茜;裘佳灵;岑诺;方佳琪-.尿路致病性大肠埃希菌通过TcpC抑制巨噬细胞吞噬的信号通路研究)[J].中华微生物学和免疫学杂志,2022(08):602-608
A类：
TcpC,tcpc,rTcpC,Detoxi
B类：
尿路致病性大肠埃希菌,巨噬细胞,细胞吞噬,生物信息学软件,氨基酸序列,序列结构,结构与功能,同长,原核表达,表达系统,NTA,亲和层析,层析法,重组蛋白,N110,N150,N170,Gel,层析柱,LPS,blot,TIR,孵育,MyD88,促炎因子,位色,色氨酸,泛素连接酶活性,IPTG,有效表达,提纯,条带,gel,p50,p65,磷酸化,固有免疫,免疫活性
AB值：
0.166176
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