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半胱氨酸蛋白酶抑制剂C重组蛋白的制备
文献摘要：
目的 构建半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(CysC)原核表达载体,用以快速获取低成本、高浓度、高纯度的CysC纯化蛋白,为制备应用于临床实验室检测的CysC标准物质和质控品奠定基础.方法 用Codon Adaptation Tool将人的CysC编码序列优化为大肠杆菌偏好的密码子序列,再将合成的DNA片段克隆至pET?28a(+)原核表达载体.将重组CysC表达质粒转化至E.coli BL21感受态中,优化诱导表达条件、确定最优表达条件组合及有效表达序列,并用融合标签对重组蛋白进行纯化.结果 成功构建重组CysC原核表达质粒,明确CysC表达序列,确定异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达浓度、诱导温度等条件,纯化的CysC蛋白可通过临床检测,且稀释倍数与检测浓度间呈现线性关系.结论 成功构建重组CysC的高效原核表达系统,重组CysC蛋白纯度大、浓度高、生产周期短,有望为CysC标准物质和质控品的制备提供物质基础.
文献关键词：
半胱氨酸蛋白酶抑制剂C;重组蛋白;标准物质;质控品
中图分类号：
作者姓名：
张超;李小鹏;张传宝
作者机构：
北京医院国家老年医学中心 国家卫生健康委临床检验中心 中国医学科学院老年医学研究院,北京100730
文献出处：
引用格式：
[1]张超;李小鹏;张传宝-.半胱氨酸蛋白酶抑制剂C重组蛋白的制备)[J].临床检验杂志,2022(08):567-570
A类：
B类：
半胱氨酸蛋白酶抑制剂,CysC,原核表达载体,高纯度,临床实验室,实验室检测,标准物质,质控品,Codon,Adaptation,Tool,编码序列,序列优化,大肠杆菌,密码子,子序列,pET,28a,质粒,coli,BL21,感受态,诱导表达,条件组合,有效表达,融合标签,异丙基,半乳糖,糖苷,IPTG,重组蛋白表达,临床检测,倍数,表达系统,蛋白纯度,生产周期,周期短
AB值：
0.311632
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