典型文献
屎肠球菌132胆盐水解酶基因的克隆表达与酶学特性
文献摘要：
该研究旨在探究降胆固醇潜在菌株屎肠球菌132胆盐水解酶(bile salt hydrolase,BSH)的活性,通过PCR技术克隆目的基因并在大肠杆菌BL21中表达,同时探讨其酶学特性.利用茚三酮法对其菌体破碎液BSH活性进行测定,比酶活达0.55 U/mg.通过克隆其目的基因,连接pET-28a(+)的表达载体并进行异源表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)实验显示,该酶分子量约37 ku.当底物为甘氨胆酸钠(glycocholic acid,GCA)、pH 5.50时,BSH酶活达4.93 U/mg.酶学特性结果表明,GCA为底物、pH 5.50、温度为30℃时达最适条件,BSH水解能力最强,酶活达6.59 U/mg,温度在4～30℃时,pH为5～7有较好的热稳定和pH稳定性.不同离子对酶活的影响实验表明Na+、Ca2+、Mg2+均对酶活有激活作用;Mn2+、Fe2+对酶活影响不大,但Ni2+、Al3+、Li2+、Co2+、Zn2+均对酶活有强抑制作用,比酶活降到10％以下,几乎丧失活性.通过酶反应动力学得出该酶的Vmax为6.44μmol/(min·mg),Km值为3.16 mmol/L.因此,通过bsh基因克隆并异源表达,提高了屎肠球菌132BSH活性,并且BSH水解各类胆盐能力较强,为降胆固醇功能食品的开发与应用奠定基础.
文献关键词：
屎肠球菌132;胆盐水解酶;基因克隆;异源表达;酶学特性
中图分类号：
作者姓名：
杨玲双;谢新强;李滢;张菊梅;丁郁;吴清平;王涓
作者机构：
华南农业大学食品学院,广东广州 510642;广东省科学院微生物研究所,广东省微生物安全与健康重点实验室,华南应用微生物国家重点实验室,广东广州 510075
文献出处：
引用格式：
[1]杨玲双;谢新强;李滢;张菊梅;丁郁;吴清平;王涓-.屎肠球菌132胆盐水解酶基因的克隆表达与酶学特性)[J].现代食品科技,2022(08):35-43
A类：
Li2+,bsh,132BSH
B类：
屎肠球菌,胆盐水解酶,酶基因,克隆表达,酶学特性,降胆固醇,bile,salt,hydrolase,目的基因,大肠杆菌,BL21,茚三酮法,菌体,比酶活,pET,28a,表达载体,异源表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳,SDS,PAGE,分子量,ku,底物,甘氨胆酸,胆酸钠,glycocholic,acid,GCA,热稳定,同离子,离子对,Na+,Ca2+,Mg2+,Mn2+,Fe2+,Ni2+,Al3+,Co2+,Zn2+,强抑制,失活,反应动力学,学得,Vmax,Km,基因克隆,功能食品,开发与应用
AB值：
0.360877
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