典型文献
牡蛎抗菌肽Molluscidin的密码子优化、重组毕赤酵母表达及抑菌活性
文献摘要：
目的:利用重组毕赤酵母高效表达抑菌活性较好的牡蛎抗菌肽Molluscidin.方法:按照毕赤酵母密码子偏好性优化合成牡蛎抗菌肽Molluscidin,利用生物信息学方法分析其基本理化性质,经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切后与表达载体pPICZαA连接,构建重组质粒pPICZαA-CgMoCo,电转至毕赤酵母X-33,利用博来霉素抗性和PCR筛选阳性转化子,利用甲醇诱导表达并结合SDS-PAGE和Western blot分析验证,通过甲醇浓度和培养时间优化诱导表达条件,利用滤纸片琼脂扩散法测定培养上清的抑菌活性.结果:获得优化核酸序列,生物信息学分析显示Molluscidin的预期分子量为6521.87 Da,等电点为11.28,在酵母体内半衰期>20 h,理化性质较为稳定;成功构建重组质粒pPICZαA-CgMoCo,目的基因成功嵌入毕赤酵母,SDS-PAGE和Western blot验证获得1株高效表达的重组酵母,其优化表达条件为30℃、250 r/min、1.0％甲醇诱导表达48～72 h,滤纸片琼脂扩散法初步证明重组Molluscidin对大肠杆菌、肺炎克雷伯菌等革兰氏阴性菌和金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌等革兰氏阳性菌均具有较好的抑菌活性.结论:筛选到1株重组毕赤酵母X-33/pPICZαA-CgMoCo,能高效表达抑菌活性较好的重组牡蛎抗菌肽Molluscidin,为其生产应用奠定了基础,也为重组贝类来源抗菌肽的开发利用提供了可资参考的技术途径.
文献关键词：
牡蛎;抗菌肽;毕赤酵母;重组表达;抑菌活性;Molluscidin
中图分类号：
作者姓名：
谭强来;曾臻;许莉;杨彩娟;陆馨敏;丰艳;卢艺玲;罗家英;陈馨雨
作者机构：
厦门医学院海洋生物医药资源福建省高校工程研究中心,福建厦门 361023;厦门医学院天然化妆品福建省高校工程研究中心,福建厦门 361023
文献出处：
引用格式：
[1]谭强来;曾臻;许莉;杨彩娟;陆馨敏;丰艳;卢艺玲;罗家英;陈馨雨-.牡蛎抗菌肽Molluscidin的密码子优化、重组毕赤酵母表达及抑菌活性)[J].食品工业科技,2022(03):106-113
A类：
Molluscidin,CgMoCo
B类：
牡蛎,抗菌肽,密码子优化,毕赤酵母,酵母表达,抑菌活性,高效表达,密码子偏好性,优化合成,利用生物,生物信息学方法,基本理化性质,EcoR,Not,双酶,表达载体,pPICZ,重组质粒,转至,博来霉素,阳性转化子,甲醇诱导,诱导表达,SDS,PAGE,blot,分析验证,培养时间,时间优化,滤纸片,琼脂扩散法,养上,上清,生物信息学分析,分子量,Da,等电点,母体,半衰期,目的基因,株高,重组酵母,大肠杆菌,肺炎克雷伯菌,革兰氏阴性菌,金黄色葡萄球菌,枯草芽孢杆菌,革兰氏阳性菌,株重,生产应用,贝类,技术途径,重组表达
AB值：
0.301203
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