典型文献
重组人干扰素α2b单克隆抗体亲和层析介质的制备及其纯化效果评价
文献摘要：
目的 制备重组人干扰素α2b(recombinant human interferon α2b,rhIFNα2b)单克隆抗体的亲和层析介质,并评价其纯化效果.方法 采用小鼠杂交瘤细胞融合技术及小鼠体内诱生法筛选并制备rhIFNα2b单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb),经 AT Protein A 亲和层析纯化,12％还原型 SDS-PAGE 鉴定纯度,Western blot 法鉴定 McAb与rhIFNα2b原液及其聚合蛋白(rhIFNα2b原液于56℃热加速处理)的特异性反应.用筛选的McAb与CNBr-activated BestaroseTT4FF偶联1～4 h,紫外-可见分光光度法监测偶联液上清McAb蛋白浓度,12％还原型SDS-PAGE验证偶联介质抗体蛋白饱和程度,确定最佳偶联时间.将制备的McAb亲和层析介质装柱后,上样rhIFNα2b原液及经56℃热加速24 h的样品,15％非还原SDS-PAGE验证其纯化效果.结果 经杂交瘤制备和筛选,确定以4E2抗体作为偶联McAb,纯度＞95％.McAb 4E2与CNBr-activated BestaroseTM 4FF偶联3 h后抗体蛋白浓度趋于平稳,预活化凝胶介质抗体蛋白吸附率约为30 mg/mL,凝胶介质偶联抗体蛋白量趋于饱和,为使偶联更加充分,确定最佳偶联时间为4 h.rhIFNα2b原液及其56℃热加速24 h样品可由McAb亲和柱层析有效吸附洗脱,并保持与McAb的结合活性.结论 本实验制备的rhIFNα2b单克隆抗体亲和层析介质,具有良好的纯化效果,为rhIFNα2b不同剂型比对样品的前处理提供了高效方法.
文献关键词：
重组人干扰素α2b;单克隆抗体;亲和层析;纯化
中图分类号：
作者姓名：
顾建阳;王宇;孙子琪;张雯雯;常军亮
作者机构：
长春生物制品研究所有限责任公司,吉林长春130012
文献出处：
引用格式：
[1]顾建阳;王宇;孙子琪;张雯雯;常军亮-.重组人干扰素α2b单克隆抗体亲和层析介质的制备及其纯化效果评价)[J].中国生物制品学杂志,2022(07):844-847,852
A类：
亲和层析介质,CNBr,BestaroseTT4FF,4E2,BestaroseTM
B类：
重组人干扰素,2b,单克隆抗体,recombinant,human,interferon,rhIFN,杂交瘤细胞,细胞融合,融合技术,monoclonal,antibody,McAb,AT,Protein,层析纯化,还原型,SDS,PAGE,blot,原液,热加,activated,偶联,可见分光光度法,上清,蛋白浓度,佳偶,趋于平稳,预活化,蛋白吸附,吸附率,蛋白量,亲和柱,柱层析,洗脱,结合活性,实验制备,剂型,前处理,高效方法
AB值：
0.211841
机标中图分类号，由域田数据科技根据网络公开资料自动分析生成，仅供学习研究参考。
