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柯萨奇病毒A组10型抗原双抗体夹心ELISA定量方法的建立及应用
文献摘要：
目的:建立柯萨奇病毒A组10型(coxsackievirus A10，CV-A10)抗原双抗体夹心ELISA定量检测方法，用于CV-A10生产过程样品和四价手足口病疫苗的质量控制。方法:以纯化的CV-A10抗原分别免疫绵羊和小鼠获得羊免疫血清和杂交瘤单克隆抗体(单抗)细胞株，以杂交瘤细胞株免疫小鼠制备腹水，羊血清和小鼠腹水分别经亲和层析后获得纯化羊抗CV-A10多克隆抗体(多抗)和小鼠抗CV-A10单抗。采用微量细胞病变法测定纯化多抗和单抗中和抗体效价。分别以纯化羊多抗作为包被抗体、小鼠单抗作为检测抗体，进行配对筛选研究，建立CV-A10抗原定量双抗体夹心ELISA；对方法的线性、专属性、准确度、精密度、范围进行验证，并对CV-A10抗原生产过程中的样品和成品进行检测。结果:纯化抗CV-A10单抗和多抗均具有中和抗体活性。以多抗作为包被抗体、7株单抗作为检测抗体进行配对，其中5株单抗配对成功，选择CY166-14R作为检测抗体用于CV-A10抗原定量检测ELISA的建立；对检测方法进行优化，确定以羊多抗作为包被抗体的使用稀释比例为1∶5 000~1∶10 000、小鼠单抗检测抗体稀释比例1∶2 000~1∶4 000。建立的CV-A10抗原定量检测方法范围为0.42~10.00 U/ml，线性决定系数≥0.99；该方法仅能特异性检测CV-A10抗原，与其他抗原或物质(肠道病毒71型、CV-A6、CV-A16、M199、DMEM、Vero细胞蛋白、牛血清)无交叉反应；对高、中、低浓度样品进行测定，测定值/理论值在95%~110%之间，相对标准偏差在15%以内。结论:建立了CV-A10抗原定量双抗体夹心ELISA，该方法在一定范围内的线性、专属性、准确度、精密度均较好，可用于CV-A10抗原生产过程样品和成品的质量控制，为CV-A10抗原的体外效力评价提供方法学基础。
文献关键词：
柯萨奇病毒;抗体，单克隆;酶联免疫吸附测定;手足口病;抗原;双抗体夹心法;定量分析
中图分类号：
作者姓名：
鲁卫卫;郭会杰;刘善茹;郝春生;杨永娟;张中洋;李秀玲
作者机构：
国药中生生物技术研究院有限公司第二研究室，北京 101111;上海生物制品研究所有限责任公司，上海 200051
文献出处：
引用格式：
[1]鲁卫卫;郭会杰;刘善茹;郝春生;杨永娟;张中洋;李秀玲-.柯萨奇病毒A组10型抗原双抗体夹心ELISA定量方法的建立及应用)[J].国际生物制品学杂志,2022(06):310-315
A类：
CY166,14R
B类：
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AB值：
0.257128
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