典型文献
新冠病毒主蛋白酶小分子抑制剂荧光共振能量转移高通量筛选模型的优化与应用
文献摘要：
基于荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET)原理,以新冠病毒主蛋白酶(main protease,Mpro)为靶标,建立并应用Mpro小分子抑制剂FRET高通量筛选模型,以期快速筛选新型Mpro小分子抑制剂.利用大肠杆菌原核表达与分离纯化高活性的Mpro,再以FRET法进行比活力测定.基于FRET原理,以7-甲氧基香豆素-4-乙酸(7-methoxycoumarin-4-acetic acid,MCA)与2,4-二硝基苯酚(2,4-dinitropheno,Dnp)标记的多肽作为Mpro水解底物,通过优化反应缓冲液、Mpro反应浓度、反应温度与时间及DMSO耐受浓度,建立并应用Mpro小分子抑制剂FRET高通量筛选模型进行苗头化合物的筛选.利用大肠杆菌实现了高活性Mpro的原核表达与分离纯化,且比活力不低于40 000 U/mg.通过一系列优化实验,使用0.4 μmol/LMpro与5 μmol/L底物建立了 Z'因子值为0.79的Mpro小分子抑制剂FRET高通量筛选模型,且反应体系中含有的二硫苏糖醇(1,4-dithiothreitol,DTT)是影响FRET筛选模型可靠性的重要因素.通过对天然产物化合物库进行高通量筛选,发现白花丹素与银杏酸在体外对Mpro酶活性具有良好的抑制作用.本研究建立了基于FRET原理的Mpro小分子抑制剂高通量筛选模型,初步证实了白花丹素与银杏酸是一类新型苗头化合物,为抗新型冠状病毒药物先导化合物的筛选与发现奠定了基础.
文献关键词：
新冠病毒;主蛋白酶抑制剂;荧光共振能量转移;高通量筛选;白花丹素;银杏酸
中图分类号：
作者姓名：
闫干干;李东升;戚海燕;付正豪;刘晓平;张晶;陈云雨
作者机构：
皖南医学院药物筛选与评价研究所,安徽芜湖241002;皖南医学院安徽省皖南地区植物药活性筛选与再评价工程实验室,安徽芜湖241002;中国医学科学院-北京协和医学院医药生物技术研究所,北京100050
文献出处：
引用格式：
[1]闫干干;李东升;戚海燕;付正豪;刘晓平;张晶;陈云雨-.新冠病毒主蛋白酶小分子抑制剂荧光共振能量转移高通量筛选模型的优化与应用)[J].生物工程学报,2022(06):2236-2249
A类：
methoxycoumarin,dinitropheno,Dnp,LMpro
B类：
新冠病毒,小分子抑制剂,荧光共振能量转移,高通量筛选,筛选模型,模型的优化,优化与应用,fluorescence,resonance,energy,transfer,FRET,main,protease,靶标,快速筛选,大肠杆菌,原核表达,分离纯化,高活性,再以,比活力,活力测定,甲氧基,香豆素,acetic,acid,MCA,二硝基苯,硝基苯酚,多肽,底物,优化反应,缓冲液,反应温度,DMSO,苗头,优化实验,反应体系,二硫苏糖醇,dithiothreitol,DTT,天然产物,白花丹素,银杏酸,抗新型冠状病毒药物,先导化合物,主蛋白酶抑制剂
AB值：
0.249536
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