制备含破伤风毒素肽(tetanus toxin,TT)、促吞噬肽(tuftsin)和新型冠状病毒刺突蛋白(spike,S蛋白)受体结合域(receptor-binding domain,RBD)的融合蛋白,探讨分子内佐剂对RBD蛋白体液免疫和细胞免疫效果的影响.将破伤风毒素肽、促吞噬肽与S蛋白RBD区域通过柔性多肽串联,密码子优化后构建重组载体,原核表达纯化制备重组S-TT-tuftsin蛋白,与铝佐剂混合后免疫BALB/c小鼠,对其体液及细胞免疫效果进行评价.重组S-TT-tuftsin蛋白以包涵体形式表达,离子交换层析纯化后采用梯度透析进行复性,复性蛋白经Dot blotting鉴定,可与新冠亚单位疫苗(安徽智飞公司)免疫后人血清发生反应.小鼠免疫实验结果表明,免疫35 d时抗体水平到达平台期,含分子内佐剂重组蛋白(铝佐剂)免疫小鼠后血清ELISA抗体效价高达1∶66 240,显著高于S-RBD蛋白(铝佐剂)免疫小鼠抗体效价(P＜0.05).同时,含分子内佐剂重组蛋白刺激小鼠产生更强的淋巴细胞增殖能力,刺激指数可达4.71±0.15,相较于S-RBD蛋白的刺激指数1.83±0.09具有显著性差异(P＜0.000 1).分子内佐剂破伤风毒素肽和促吞噬肽可显著增强新冠S蛋白RBD域的体液免疫和细胞免疫效果,可为新冠亚单位疫苗和其他病毒亚单位疫苗的研制提供理论基础和参考.

分子内佐剂;新型冠状病毒;重组蛋白;免疫

蒋静雯;王云龙;李玉林;王继创;张怡青;王旭东;王晓军;张恒

郑州大学生命科学学院,河南郑州450001;河南省生物工程技术研究中心,河南郑州450010;郑州职业技术学院生物工程系,河南郑州450010;河南省职工医院,河南郑州450002

生物工程学报

[1]蒋静雯;王云龙;李玉林;王继创;张怡青;王旭东;王晓军;张恒-.含分子内佐剂的SARS-CoV-2 RBD域重组蛋白制备及免疫效果评价)[J].生物工程学报,2022(09):3353-3362

分子内佐剂,tuftsin

SARS,CoV,RBD,重组蛋白,免疫效果评价,破伤风,tetanus,toxin,TT,促吞噬肽,毒刺,刺突蛋白,spike,受体结合域,receptor,binding,domain,融合蛋白,蛋白体,体液免疫,细胞免疫,过柔,多肽,密码子优化,重组载体,原核表达,表达纯化,铝佐剂,BALB,包涵体,离子交换层析,层析纯化,Dot,blotting,冠亚,亚单位疫苗,人血清,抗体水平,平台期,抗体效价,价高,白刺,淋巴细胞增殖,细胞增殖能力

0.285973