典型文献
周期型马来丝虫复合表位基因的构建及在真核细胞中的表达
文献摘要：
目的:构建周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂/3-磷酸甘油醛脱氢酶复合表位基因（CPI502/GAPDH720）真核表达质粒pcDNA3.1（+）-BmCPI502/BmGAPDH720，并观察其在人宫颈癌细胞（Hela细胞）中的蛋白表达。方法:根据T细胞表位预测的基因序列设计引物，以质粒pGEM-T-CPI621为模版，利用反转录PCR（RT-PCR）扩增目的基因片段，将该片段克隆至原核表达质粒pET-28a（+）中，构建原核表达质粒pET28a（+）-BmCPI502。根据软件设计合适引物，RT-PCR分别扩增BmCPI502基因和BmGAPDH720基因，pcDNA3.1（+）、BmCPI502、BmGAPDH720分别进行双酶切后进行连接，构建复合表位基因真核表达质粒pcDNA3.1（+）-BmCPI502/BmGAPDH720。将复合表位基因重组质粒转染至Hela细胞后，进行RT-PCR验证，获得与预期相符目的条带；将表达产物利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）进行检测。结果:获得了原核表达重组质粒pET28a（+）-BmCPI502，经酶切鉴定得到502 bp特异性片段，与预期值符合；成功构建了复合表位基因真核表达质粒pcDNA3.1（+）-BmCPI502/BmGAPDH720，酶切鉴定所产生的片段大小与预期符合；复合表位基因真核表达质粒pcDNA3.1（+）-BmCPI502/BmGAPDH720转染Hela细胞后得到稳定表达，SDS-PAGE鉴定分析显示重组蛋白相对分子质量（
Mr × 10
3）约为50。
结论:成功构建了周期型马来丝虫复合表位基因真核表达质粒pcDNA3.1（+）-BmCPI502/BmGAPDH720，并在真核细胞中获得相应的重组蛋白，为进一步研究重组蛋白纯化和测定其生物学活性奠定了基础。
文献关键词：
周期型马来丝虫;半胱氨酸蛋白酶抑制剂;3-磷酸甘油醛脱氢酶;重组;表位基因
中图分类号：
作者姓名：
陆施娟;蒋晗;夏瑜椰;方政
作者机构：
南通大学医学院医学形态学实验室，南通 226000
文献出处：
引用格式：
[1]陆施娟;蒋晗;夏瑜椰;方政-.周期型马来丝虫复合表位基因的构建及在真核细胞中的表达)[J].中华地方病学杂志,2022(04):277-283
A类：
周期型马来丝虫,表位基因,CPI502,GAPDH720,BmCPI502,BmGAPDH720,CPI621
B类：
真核细胞,半胱氨酸蛋白酶抑制剂,磷酸甘油,甘油醛,醛脱氢酶,真核表达质粒,pcDNA3,人宫颈癌细胞,Hela,细胞表位,表位预测,基因序列,序列设计,引物,pGEM,模版,目的基因,该片,原核表达,pET28a,软件设计,双酶,基因重组,重组质粒,质粒转染,条带,达产,十二烷基硫酸钠,聚丙烯酰胺凝胶电泳,SDS,PAGE,bp,预期值,稳定表达,鉴定分析,重组蛋白,白相,相对分子质量,Mr,10
,蛋白纯化,生物学活性
AB值：
0.191218
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