为建立检测猪血清中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)中和抗体的间接ELISA方法,分析了PRRSV结构蛋白GP5和M的二级结构抗原指数、抗原性、亲水性、表面可及性以及潜在中和表位等参数,选取GP5的47～61、143～156和186～199位氨基酸,M蛋白的63～70、133～146和156～169位氨基酸作为免疫原,构建带接头序列的GP5/M中和表位融合表达质粒;通过优化大肠杆菌表达和蛋白纯化条件,免疫印迹鉴定GP5/M特异抗原,获得了可溶性的GP5/M中和表位融合蛋白.基于纯化的GP5/M中和表位融合抗原,建立了检测猪血清中PRRSV中和抗体的间接ELI SA方法.采用建立的间接ELISA方法对6种其他猪源病原阳性血清进行检测,结果均无交叉反应;敏感性试验显示,将血清中和试验鉴定的PRRSV阳性对照血清稀释到1:12800时仍呈阳性;重复性试验显示,批内重复变异系数为2％～10％,批间重复变异系数小于15％;符合性试验显示,同时用建立的间接ELISA方法和血清中和试验对420份临床血清样品进行检测,结果符合率为95.24％.结果表明,该方法操作简单、耗时短,敏感性、特异性、重复性及符合性均良好,具有较好的应用推广价值.

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV);中和表位抗原;融合GP5/M;ELISA

李雷斌;李晓霞;王睿男;周智;刘玉良;赵柏林;孙航;冯冰;陈玲;王传彬;李义平;孙雨

广西大学动物科学技术学院,广西南宁 530004;中国动物疫病预防控制中心,国家/OIE猪繁殖与呼吸综合征参考实验室,北京 102600

中国动物检疫

[1]李雷斌;李晓霞;王睿男;周智;刘玉良;赵柏林;孙航;冯冰;陈玲;王传彬;李义平;孙雨-.PRRSV GP5和M抗原中和表位的融合表达与纯化以及间接ELISA检测方法的建立)[J].中国动物检疫,2022(03):71-79

中和表位抗原

PRRSV,GP5,融合表达,猪血,中猪,猪繁殖与呼吸综合征病毒,中和抗体,结构蛋白,二级结构,原指,抗原性,亲水性,可及性,免疫原,接头,质粒,大肠杆菌表达,蛋白纯化,免疫印迹,融合蛋白,猪源,原阳,阳性血清,交叉反应,敏感性试验,血清中和试验,试验鉴定,阳性对照,重复性试验,复变,符合性,清样,符合率,应用推广

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