典型文献
2型猪链球菌cps2D基因敲除株的构建及其基本生物学特性的研究
文献摘要：
目的 构建2型猪链球菌荚膜多糖基因簇中cps2D基因敲除株(△cps2D),比较野毒株05ZYH33与敲除株△cps2D基本生物学特性的差异.方法 设计合成引物L1/L2、R1/R2、Spc1/Spc2,分别扩增cps2D基因上、下游同源臂L片段、R片段及SpcR抗性基因S片段,将3个片段连接至pUC19线性载体上,构建敲除质粒pUC19::cps2D.将敲除质粒电转导入05ZYH33感受态细胞后,利用SpcR抗性平板筛选敲除株,并通过组合PCR和RT-PCR进一步验证.比较野毒株05ZYH33和敲除株△cps2D细菌生长特性、溶血活性、革兰染色、细菌链长、荚膜形态等方面的异同.结果 L1/L2、R1/R2、Spc1/Spc2三组引物分别扩增出L(1 030 bp)、R(1 030 bp)以及S(1 130 bp)基因片段;通过无缝克隆的方法成功构建出敲除质粒pUC19::cps2D;电转入感受态细胞后获得69个克隆,筛选出26个疑似敲除株;组合PCR以及RT-PCR筛选后获得cps2D基因敲除株△cps2D;与野毒株05ZYH33相比,△cps2D对数期生长变缓,链长显著变短,荚膜稀疏变薄.结论 成功构建cps2D基因敲除株,为后续进一步研究其调控荚膜合成的作用机制奠定基础.
文献关键词：
2型猪链球菌;荚膜多糖;酪氨酸激酶Cps2D;基因敲除;生物学性状
中图分类号：
作者姓名：
刘旭苗;王悄悄;林苗;倪华;郑峰;王怡雯;汪春晖;潘秀珍;曹祥荣
作者机构：
南京师范大学生命科学学院,南京 210023;东部战区疾病预防控制中心,南京 210002;新疆帕米尔高原生物资源与生态重点实验室,喀什大学生命与地理科学学院,喀什 844000
文献出处：
引用格式：
[1]刘旭苗;王悄悄;林苗;倪华;郑峰;王怡雯;汪春晖;潘秀珍;曹祥荣-.2型猪链球菌cps2D基因敲除株的构建及其基本生物学特性的研究)[J].中国人兽共患病学报,2022(04):285-290
A类：
cps2D,05ZYH33,Spc1,Spc2,SpcR,Cps2D
B类：
猪链球菌,基因敲除,本生,生物学特性,荚膜多糖,多糖基,基因簇,野毒株,设计合成,引物,L1,L2,R1,抗性基因,pUC19,质粒,转导,感受态,平板筛选,细菌生长,生长特性,溶血活性,革兰染色,链长,bp,无缝克隆,转入,变短,变薄,酪氨酸激酶,生物学性状
AB值：
0.198559
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