典型文献
一株海洋来源铜绿假单胞菌Gxun-7角蛋白酶基因的克隆、表达及重组酶酶学性质
文献摘要：
[背景]角蛋白酶是一类特异性降解角蛋白的水解酶,在动物饲料、生物肥料、医学、洗涤、制革及环境治理等方面具有重要的应用潜力.[目的]对前期从海洋环境筛选出的一株铜绿假单胞菌Gxun-7的角蛋白酶基因进行克隆、表达,并探究重组酶酶学性质,为角蛋白酶在工业生产中的应用奠定基础.[方法]以铜绿假单胞菌Gxun-7基因组推定的角蛋白酶基因为基础,设计引物克隆获得角蛋白酶基因kp2,构建重组表达质粒pET22b-kp2,并转化到E.coli RosettagamiB(DE3)中进行诱导表达,同时对重组表达菌株的表达条件进行优化.利用镍柱分离纯化重组角蛋白酶并研究其酶学性质.[结果]重组角蛋白酶的分子量约为33 kDa,最适温度和pH值分别为40℃和8.0,在温度30-60℃和pH 6.5-8.0具有较好的稳定性.金属离子Co2+、Cu2+和化学试剂十二烷基磺酸钠(sodium dodecyl sulfonate,SDS)、乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraacetic acid,EDTA)、苯甲基磺酰氟(phenylmethylsulfonyl fluoride,PMSF)对酶活力有抑制作用,而Mg2+、K+、巯基乙醇和二硫苏糖醇(dithiothreitol,DTT)对酶活力有促进作用.重组角蛋白酶具有良好的耐盐性,在12.5％的NaCl作用下相对酶活为87.55％.以酪蛋白为底物时,酶的Km值为60.92 mg/mL、Vmax值为9.70 U/mL.[结论]海洋来源铜绿假单胞菌Gxun-7的重组角蛋白酶具有良好的温度、碱、盐稳定性,可应用于工业生产中.
文献关键词：
铜绿假单胞菌;角蛋白酶;异源表达;酶学性质
中图分类号：
作者姓名：
杨梦莹;谢晨杰;李时勇;张红岩;王一兵;申乃坤;姜明国
作者机构：
广西民族大学海洋与生物技术学院广西多糖材料与改性重点实验室广西高校微生物与植物资源利用重点实验室,广西南宁530006
文献出处：
引用格式：
[1]杨梦莹;谢晨杰;李时勇;张红岩;王一兵;申乃坤;姜明国-.一株海洋来源铜绿假单胞菌Gxun-7角蛋白酶基因的克隆、表达及重组酶酶学性质)[J].微生物学通报,2022(11):4629-4643
A类：
kp2,RosettagamiB,phenylmethylsulfonyl
B类：
一株,海洋来源,铜绿假单胞菌,Gxun,角蛋白酶,酶基因,重组酶,酶学性质,水解酶,动物饲料,生物肥料,洗涤,制革,海洋环境,环境筛,推定,引物,重组表达,质粒,pET22b,coli,DE3,诱导表达,分离纯化,分子量,kDa,金属离子,Co2+,Cu2+,化学试剂,十二烷基磺酸钠,sodium,dodecyl,sulfonate,SDS,乙二胺四乙酸,ethylenediaminetetraacetic,acid,EDTA,苯甲基,酰氟,fluoride,PMSF,酶活力,Mg2+,K+,巯基乙醇,醇和,二硫苏糖醇,dithiothreitol,DTT,耐盐性,NaCl,酪蛋白,底物,Km,Vmax,异源表达
AB值：
0.340025
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