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香茅醇假单胞菌SJTE-3的短链脱氢酶SDR-X1的克隆及酶性质测定
文献摘要：
香茅醇假单胞菌SJTE-3能够以17β-雌二醇为唯一碳源并将其高效降解,但其催化雌二醇转化的关键酶仍不明确.本文鉴定了该菌株中降解雌二醇的短链脱氢酶SDR-X1(WP_043267487.1),并对其功能进行了研究.首先利用荧光定量PCR,检测了不同碳源条件下基因sdr-x1的转录水平;克隆基因sdr-x1,在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中诱导表达,利用亲和层析纯化获得了重组蛋白SDR-X1;体外检测了重组蛋白SDR-X1的催化活性与酶学性质,并利用高效液相色谱鉴定了其转化17β-雌二醇的产物.蛋白SDR-X1可被17β-雌二醇诱导表达;蛋白序列比对显示蛋白SDR-X1含有短链脱氢酶的保守基序与氨基酸.该酶以NAD+为辅因子,将 17β-雌二醇氧化为雌酮;其Km 值为(0.039 86±0.004061)mmol/L,Vmax值为(3.168±0.135)mmol/L/min/mg,可在15 min内转化61.75％以上的雌二醇.该酶对温度具有一定耐受性,最佳反应温度为50℃,偏碱性pH可促进其酶促反应.不同二价金属离子对该酶活性具有不同的影响,Mg2+、Mn2+和Ca2+可增强其酶活性.香茅醇假单胞菌SJTE-3中的SDR-X1可高效催化17β-雌二醇转化,参与该菌株的雌激素降解过程,其功能研究将推进细菌的雌激素代谢机制解析.
文献关键词：
香茅醇假单胞菌SJTE-3;短链脱氢酶SDR-X1;17β-雌二醇;雌酮;生物降解
中图分类号：
作者姓名：
付雅丽;彭万里;林双君;邓子新;梁如冰
作者机构：
上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国家重点实验室,上海200240
文献出处：
引用格式：
[1]付雅丽;彭万里;林双君;邓子新;梁如冰-.香茅醇假单胞菌SJTE-3的短链脱氢酶SDR-X1的克隆及酶性质测定)[J].生物技术通报,2022(03):121-129
A类：
SJTE,sdr
B类：
香茅,假单胞菌,SDR,X1,雌二醇,唯一碳源,关键酶,WP,不同碳源,x1,转录水平,大肠杆菌,BL21,DE3,诱导表达,亲和层析,层析纯化,重组蛋白,体外检测,催化活性,酶学性质,序列比对,保守基序,NAD+,辅因子,醇氧化,雌酮,Km,Vmax,耐受性,反应温度,酶促反应,二价,价金,金属离子,离子对,Mg2+,Mn2+,Ca2+,高效催化,雌激素,降解过程,功能研究,激素代谢,代谢机制,机制解析,生物降解
AB值：
0.327566
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