典型文献
美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光定量PCR检测方法的建立
文献摘要：
为建立检测美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的荧光定量PCR方法,在本实验室前期试验筛选到扩增效果相对最好的3对引物(扩增基因区域对应ORF6)的基础上,本研究以PRRSVCH-1R株cDNA作为模板,利用这3对引物进行PCR扩增,将扩增产物克隆至pMD18-T载体,构建3个重组质粒标准品.采用方阵法对荧光定量PCR反应条件优化,最终建立了 3对引物的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法.结果显示,标准曲线Ct值均与相应质粒标准品浓度存在良好的线性关系,相关系数(R2)分别为0.992、0.999、0.999;该方法除对美洲型PRRSV有特异性扩增外,对猪圆环病毒2型(PCV2)、伪狂犬病毒(PRV)、猪瘟病毒(CSFV)、欧洲型PRRSV等病原的基因组DNA或cDNA均无扩增,特异性强;对3种质粒标准品的检测下限均为1.228×101拷贝/μL,敏感性高;组内与组间重复性试验变异系数均小于2％,重复性较好.利用该方法检测6份经预检的PRRS临床样品,3对引物的阳性检出率均为100％,与国标荧光定量PCR方法检出率相当,高于常规PCR(50％、50％和83.3％)的阳性检出率.尽管该方法的3对引物和国标方法均能检出,但部分样品不同引物检测的Ct值有差异.本研究通过利用多对引物并提高引物覆盖面,可减少因引物结合位点突变引起的检测不准确问题,3对引物中,若有1对引物检测样品的结果呈阳性,则该样品判为阳性样品,本研究为PRRSV的快速和定量检测提供了思路和方法.
文献关键词：
猪繁殖与呼吸综合征病毒;荧光定量PCR;SYBR Green Ⅰ
中图分类号：
作者姓名：
查帆;李倩文;孙广禄;余子豪;王晓洁;余旭平
作者机构：
浙江大学动物科学学院,浙江 杭州 310058
文献出处：
引用格式：
[1]查帆;李倩文;孙广禄;余子豪;王晓洁;余旭平-.美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光定量PCR检测方法的建立)[J].中国预防兽医学报,2022(07):731-736,749
A类：
PRRSVCH
B类：
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AB值：
0.284999
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