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鼠原始生殖细胞报告基因系统的建立及验证
文献摘要：
目的:构建小鼠原始生殖细胞(PGCs)报告基因系统.方法:根据CRISPR基因编辑技术结合同源重组原理,针对鼠Prdm1和Dppa3基因的翻译起始位点ATG附近位置分别设计一对sgRNA,并根据Cas9切割位点以及拟插入目的片段构建相应的用于同源重组的供体质粒,将sgRNA与Donor质粒同时转染入小鼠胚胎干细胞(ESCs)中,并利用质粒携带的抗性基因筛选出目标单克隆细胞,并进行基因型鉴定.结果:通过提取单克隆细胞的基因组DNA进行基因型鉴定,PCR和Sanger测序结果显示,单克隆细胞的基因组中,Prdm1和Dppa3基因翻译起始位点后分别成功插入eGFP和mCherry荧光蛋白编码序列.利用细胞因子诱导eGFP-Prdm1/mCherry-Dppa3mESCs(mouse ESCs)定向分化为mPGCs(mouse PGCs),流式细胞仪检测显示诱导分化的mPGCs特异表达eGFP和mCherry荧光信号.结论:成功构建mPGCs报告基因系统,可用于后续研究mPGCs命运决定的分子机制,对于研究小鼠早期胚胎发育过程具有重要意义.
文献关键词：
胚胎干细胞;原始生殖细胞;基因敲入
中图分类号：
作者姓名：
黄书奇;阎晗;胡德庆
作者机构：
天津医科大学基础医学院细胞生物学系,天津300070
文献出处：
引用格式：
[1]黄书奇;阎晗;胡德庆-.鼠原始生殖细胞报告基因系统的建立及验证)[J].天津医科大学学报,2022(06):602-608
A类：
Prdm1,Dppa3mESCs,mPGCs
B类：
原始生殖细胞,报告基因,CRISPR,基因编辑技术,技术结合,同源重组,起始位,ATG,sgRNA,Cas9,切割位点,供体,质粒,Donor,转染,小鼠胚胎干细胞,抗性基因,基因筛选,标单,单克隆细胞,基因型鉴定,Sanger,别成,eGFP,mCherry,荧光蛋白,蛋白编码,编码序列,mouse,流式细胞仪,诱导分化,特异表达,荧光信号,小鼠早期胚胎,早期胚胎发育,基因敲入
AB值：
0.289124
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