典型文献
二甲双胍和LPS通过转录因子RUNX2调控NFATc2基因的转录
文献摘要：
目的 构建人T细胞活化核因子C2(NFATc2)基因启动子荧光素酶报告基因载体pGL3-NFATc2-promoter,检测其转录活性,探究二甲双胍和脂多糖对其转录活性的影响.方法 利用UCSC网站查找人NFATc2基因的启动子序列并设计上下游引物PCR扩增人NFATc2基因启动子片段;用限制性内切酶KpnⅠ和HindⅢ双酶切质粒pGL3-basic,将人NFATc2基因启动子片段插入到pGL3-basic质粒,重组质粒命名为pGL3-NFATc2-promoter.将pGL3-NFATc2-promoter与内参质粒pRL-TK共转染293F细胞,检测其荧光素酶活性.同时构建人NFATc2基因启动子不同片段长度的报告基因载体并进行荧光素酶活性检测,分别给予不同浓度的二甲双胍和脂多糖处理24 h后检测二甲双胍和脂多糖对NFATc2转录活性的影响.进一步突变NFATC2基因启动子上转录因子RUNX2的结合位点探究二甲双胍和脂多糖对NFATc2的转录调控作用.结果 研究成功构建了不同片段长度(2170、2077、1802、1651、1083、323 bp)的人NFATC2基因启动子荧光素酶报告基因载体pGL3-NFATc2-promoter,经酶切及测序鉴定完全正确.将不同片段长度的pGL3-NFATc2-promoter转染到293F细胞,发现pGL3-1651 bp具有最高转录活性,荧光素酶活性约为pGL3-2170 bp的3.3倍(1.8433±0.1457 vs 0.5467±0.0850).中浓度(5 mmol/L)和高浓度(10 mmol/L)的二甲双胍分别上调pGL3-1651 bp的转录活性多达2.5、3倍(1.3467±0.1601 vs 0.8867±0.0321,1.8124±0.2771 vs 0.8867±0.0321).不同剂量的脂多糖均能上调pGL3-1651 bp的转录活性不低于1.6倍(1.4813±0.0616 vs 0.8867±0.0321).突变pGL3-1651 bp上的RUNX2结合位点后,二甲双胍和脂多糖上调的pGL3-1651 bp转录活性均受到抑制,转录活性下降(2.1667±0.1527 vs 1.233±0.1155;2.3667±0.2887 vs 1.1333±0.3786).结论 pGL3-NFATc2-promoter在293F细胞中能被转录激活,并证实脂多糖和二甲双胍转录激活pGL3-NFATc2-promoter依赖于转录因RUNX2.
文献关键词：
NFATc2;脂多糖;二甲双胍;RUNX2;报告基因
中图分类号：
作者姓名：
薛晓阳;李忠豪;赵明
作者机构：
南方医科大学第二临床医学院,广东 广州 510515;广东省医学休克微循环重点实验室,南方医科大学基础医学院病理生理学教研室,广东 广州 510515
文献出处：
引用格式：
[1]薛晓阳;李忠豪;赵明-.二甲双胍和LPS通过转录因子RUNX2调控NFATc2基因的转录)[J].南方医科大学学报,2022(03):425-431
A类：
NFATc2,NFATC2
B类：
二甲双胍,LPS,RUNX2,细胞活化,核因子,基因启动子,荧光素酶报告基因,基因载体,pGL3,promoter,转录活性,脂多糖,UCSC,启动子序列,上下游,引物,增人,限制性内切酶,Kpn,Hind,双酶,basic,重组质粒,内参,pRL,TK,共转染,293F,荧光素酶活性,段长度,活性检测,结合位点,转录调控,bp,完全正确,多达,不同剂量,转录激活
AB值：
0.175368
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