典型文献
人前列腺癌细胞PFK FB4基因RNA干扰慢病毒构建与鉴定
文献摘要：
目的 构建人前列腺癌细胞PFK FB4基因短发夹RNA(shRNA)干扰慢病毒载体,建立稳定干扰的人前列腺癌细胞株.方法 通过GenBank检索人PFK FB4基因序列,根据shRNA引物设计原则,设计并合成PFK FB4-shRNA序列,并与携带绿色荧光蛋白序列的LV3载体连接,获得的重组质粒与慢病毒包装质粒系统共转染293T细胞,收集病毒.使用逐孔稀释滴度测定法对慢病毒滴度进行测定.将LV3-PFK FB4-shRNA慢病毒载体感染人前列腺癌细胞设置为空载的LV3 Negative Control组(LV3-NC组)、空白对照组(Blank组)和LV3-shPFKFB4组.采用RT-PCR检测人前列腺癌细胞PFK FB4 mRNA水平.结果 重组质粒测序结果显示LV3-PFKFB4-shRNA慢病毒载体构建成功,通过荧光显微镜计数荧光细胞,结合稀释倍数计算病毒滴度为1×108TU/mL.RT-PCR结果显示,与LV3-NC组和Blank组相比,LV3-shPFKFB4组PFK FB4 mRNA水平显著降低(P<0.001),而LV3-NC组与Blank组PFK FB4-mRNA水平比较差异无统计学意义(P=0.271).结论 LV3-PFKFB4-shRNA慢病毒载体构成功,同时获得稳定感染的人前列腺癌细胞株.
文献关键词：
PFK FB4基因;RNA干扰;短发夹RNA;慢病毒载体;前列腺癌
中图分类号：
作者姓名：
郝南;农德勇;李钻;林俊浩;黄桂海;李锡明;李伟
作者机构：
广西壮族自治区人民医院泌尿外二科,广西 南宁 530021
文献出处：
引用格式：
[1]郝南;农德勇;李钻;林俊浩;黄桂海;李锡明;李伟-.人前列腺癌细胞PFK FB4基因RNA干扰慢病毒构建与鉴定)[J].西部医学,2022(08):1115-1120
A类：
FB4,shPFKFB4,108TU
B类：
前列腺癌细胞,短发,发夹,shRNA,慢病毒载体,定干,细胞株,GenBank,基因序列,引物设计,并合,绿色荧光蛋白,LV3,重组质粒,慢病毒包装,统共,共转染,293T,测定法,病毒滴度,空载,Negative,Control,NC,空白对照,Blank,载体构建,荧光显微镜,倍数,稳定感
AB值：
0.162256
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