目的 通过构建早期基因4开放读码框1(E4ORF1)真核表达载体,探讨E4ORF1蛋白调节前脂肪细胞3T3-L1(小鼠胚胎成纤维细胞)利用葡萄糖的作用.方法 通过分子克隆技术构建pcD-NA3.1-E4ORF1重组质粒,并进行DNA测序鉴定.将前脂肪细胞3T3-L1分为对照组和E4ORF1转染组,检测两组细胞第0、1、2、3天培养基中葡萄糖浓度,利用RT-qPCR和Western-Blot检测两组细胞第0、1、2、3、4天E4ORF1、己糖激酶2(HK2)、糖原合酶1(GYS1)mRNA和蛋白质的表达情况.油红O染色观察两组细胞第0、1、2、3、4天分化及脂质积累情况,检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)、脂肪酸结合蛋白4(FABP4)、脂肪酸合成酶(FASN)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)mRNA和蛋白质的表达情况.结果 成功构建N端带FLAG(DYKDDDDK肽)标签的真核表达载体pcDNA3.1-E4ORF1.与对照组相比,E4ORF1转染组细胞培养基中葡萄糖浓度随培养时间延长下降更快,差异有统计学意义(P<0.01).RT-qPCR和Western-Blot结果显示,与对照组相比,转染组E4ORF1的mRNA和蛋白表达水平均显著增高,差异有统计学意义(P<0.05).E4ORF1转染组的糖酵解关键酶基因HK2和糖原合酶基因GYS1 mRNA和蛋白质的表达均显著上升(P均<0.05).油红O染色显示两组细胞均无成脂分化现象,脂肪细胞分化标志基因PPARγ、C/EBPα、FABP4、FASN、ACC的mRNA和蛋白表达水平均无显著变化(P>0.05).结论 成功构建pcD-NA3.1-E4ORF1真核表达载体;在前脂肪细胞3T3-L1中,E4ORF1可能通过促进HK2和GYS1的表达,参与细胞对葡萄糖的分解和糖原合成过程,对前脂肪细胞的分化无影响.

36型人腺病毒;早期基因4开放读码框1;己糖激酶;前脂肪细胞3T3-L1;糖代谢

王冰丽;陈哲;艾柯代姆·阿卜杜克热木;刘迪晖;赵炳尧;关亚群

新疆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室,省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室,乌鲁木齐830011

新疆医科大学学报

[1]王冰丽;陈哲;艾柯代姆·阿卜杜克热木;刘迪晖;赵炳尧;关亚群-.36型人腺病毒E4ORF1真核表达载体的构建及其促进前脂肪细胞3T3-L1对葡萄糖利用的作用初探)[J].新疆医科大学学报,2022(05):469-478

E4ORF1,GYS1,DYKDDDDK

人腺病毒,真核表达载体,进前,前脂肪细胞,3T3,L1,早期基因,读码,节前,小鼠胚胎成纤维细胞,分子克隆,克隆技术,技术构建,重组质粒,转染,中葡,葡萄糖浓度,qPCR,Blot,己糖激酶,HK2,天分,脂质积累,过氧化物酶体增殖物激活受体,PPAR,CCAAT,增强子,EBP,脂肪酸结合蛋白,FABP4,脂肪酸合成酶,FASN,辅酶,羧化酶,ACC,FLAG,pcDNA3,细胞培养,培养时间,蛋白表达水平,糖酵解关键酶,关键酶基因,无成,成脂分化,分化现象,脂肪细胞分化,标志基因,糖原合成,合成过程,细胞的分化,糖代谢

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