典型文献
稳定低表达GSNOR细胞系Neuro-2a的构建及其对S-亚硝基化的影响
文献摘要：
目的:探讨转染慢病毒载体构建稳定低表达S-亚硝基谷胱甘肽还原酶(S-nitrosoglutathione reduc-tase,GSNOR)的小鼠神经母细胞瘤Neuro-2a细胞系,并考察稳定低表达GSNOR对S-亚硝基化修饰水平的影响.方法:构建靶向GSNOR的慢病毒载体,用LipoFiter?脂质体转染Neuro-2a细胞,并用嘌呤霉素筛选稳定低表达GSNOR的细胞系.光镜观察Neuro-2a细胞的形态变化,CCK-8法检测转染不同时间后的细胞活力,RT-qPCR和Western blot检测GSNOR的mRNA和蛋白表达水平.生物素转换法检测转染后Neuro-2a细胞内总S-亚硝基化蛋白水平.结果:HBLV-m-ADH5-shRNA1-PURO慢病毒载体序列与目的序列结果一致,提示慢病毒载体构建成功.嘌呤霉素筛选后,光镜观察Neuro-2a细胞形态良好,CCK-8实验结果显示在24、48、72和96 h时点细胞活力无显著差异,提示转染对细胞活力无明显影响.转染第2、4和6代后细胞内GSNOR mRNA水平分别是空载病毒组的37.02％、40.66％和30.13％,均显著降低(P<0.01),GSNOR蛋白表达水平较空载病毒组亦显著下降(P<0.01).此外,稳定低表达GSNOR的Neuro-2a细胞中蛋白S-亚硝基化修饰水平显著上调(P<0.01).结论:稳定低表达GSNOR的Neu-ro-2a细胞系构建成功,GSNOR低表达可上调胞内总蛋白的S-亚硝基化修饰水平.
文献关键词：
S-亚硝基谷胱甘肽还原酶;慢病毒;Neuro-2a细胞;S-亚硝基化
中图分类号：
作者姓名：
严洁萍;韩臻平;李婷婷;王思懿;高立;罗双;李汉兵;黄萍
作者机构：
浙江工业大学药学院,浙江杭州310014;浙江省人民医院/杭州医学院附属人民医院临床药学中心药学部,浙江杭州310014;浙江省内分泌腺体疾病诊疗重点实验室,浙江杭州310014
文献出处：
引用格式：
[1]严洁萍;韩臻平;李婷婷;王思懿;高立;罗双;李汉兵;黄萍-.稳定低表达GSNOR细胞系Neuro-2a的构建及其对S-亚硝基化的影响)[J].中国病理生理杂志,2022(09):1547-1552
A类：
nitrosoglutathione,LipoFiter,ADH5
B类：
低表达,GSNOR,细胞系,Neuro,2a,亚硝基化,慢病毒载体,载体构建,谷胱甘肽还原酶,reduc,tase,神经母细胞瘤,脂质体转染,嘌呤霉素,光镜,形态变化,CCK,细胞活力,qPCR,blot,蛋白表达水平,生物素,转换法,HBLV,shRNA1,PURO,细胞形态,时点,空载,病毒组,可上,总蛋白
AB值：
0.195286
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